由于卵巢中流細胞質(zhì)膜上的磷脂酰絲氨酸(phosphati[1]dylserine,PS)可以外泌體形式分泌入血,惡性卵巢ai患者血漿外泌體中的PS水平明顯高于卵巢良xing病變患者和健康對照者,因此外泌體中的PS可用于協(xié)助早期卵巢惡性中流的篩查和診斷。外泌體可穿透血-腦脊液屏障的特點也為腦中流患者提供了早期診斷的重要工具。血漿微囊泡EGFRvIIImRNA已被證明可作為膠質(zhì)母細胞瘤患者診斷的支持證據(jù)。2020年,DavidLyden和WilliamR.Jarnagin教授團隊合作,通過探究來自不同ai種組織、血漿和其他體液的426個人類樣品中細胞外囊泡和顆粒(extracellularvesicleandparticle,EVP)的蛋白質(zhì)組學特征,鑒定出一批中流特異性血漿EVP蛋白(特異度和靈敏度分別為95%和90%),并可區(qū)分患者的中流類型,使基于外泌體的中流診斷和鑒別診斷向前邁進了一步。外泌體是細胞在特定條件下分泌的小囊泡,是細胞間傳遞信號,相互溝通和影響的重要工具。血漿外泌體miRNA測序
外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成。它也由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細胞。根據(jù)外泌體數(shù)據(jù)庫ExoCarta的資料,目前已知約有8000種蛋白質(zhì)和194種脂質(zhì)與外泌體相關。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細胞分泌,包括滑膜液,母乳,血液,尿液,唾液,羊水和血液中的血清,這表明它們在細胞間通訊和觸發(fā)生理反應中起著重要的作用。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì)。簡而言之,它們是天然膜囊泡,將蛋白質(zhì),RNA,DNA和脂質(zhì)從一個細胞攜帶到另一個細胞,從而調(diào)節(jié)受體細胞的生物功能。細胞外囊泡的分離方法外泌體并作為癥狀早期診斷技術,應用于與癥狀進展相關的研究。
磁珠免疫法分離外泌體:將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面,然后將磁珠與樣品共孵育,使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復合物,再用蒸餾水或者PBS沖洗,結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主要是,珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體,從而提高了分離效率。此外,使用磁珠時,樣品起始體積沒有上限,而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL,且ELISA洗脫雜質(zhì)時容易造成孔間交叉污染。當將磁珠法與金標準外泌體分離方法進行比較時,磁珠法可分離出更純凈的外泌體,特異性高、速度更快,并且不需要昂貴的儀器。另外,與其他分離方法(如超速離心或超濾)相比,磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時,外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。
外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,快速直達基底層起效;富含100+多種胞外基質(zhì)蛋白、胞外基質(zhì)酶以及細胞黏附分子;能夠有效促進皮膚成纖維細胞(HDFs)中I型膠原蛋白、成纖維蛋白,促進皮膚有效快速再生(Rejuvenation);能夠有效促進皮膚成纖維細胞(HDFs)彈性蛋白生成,保持皮膚飽滿和彈性;有效降低皮膚成纖維細胞(HDFs)中膠原蛋白酶(MMP-1)的生成從而防止皮膚間質(zhì)中IIIIII型膠原蛋白被降解;富含活性物質(zhì)能夠促進皮膚有些血管的修復與重建再生。外泌體是細胞分泌的納米級膜微粒,能在細胞與細胞之間傳遞信息。
外泌體的提取分離方法:1、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心:在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。外泌體存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。江西干細胞外泌體
外泌體是包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30–150nm),由所有體外和體內(nèi)細胞持續(xù)分泌。血漿外泌體miRNA測序
密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,目前普遍應用的是蔗糖,這種方法可以成功地將亞細胞成分(例如過氧化物酶體,線粒體和核內(nèi)體)分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部,當施加離心力時,樣品中的顆粒以獨特的速率通過梯度,該梯度以從上到下的密度增加。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,隨后可以通過分餾收集,密度梯度超速離心對從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。此方法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣、費時且會造成外泌體損失。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。血漿外泌體miRNA測序
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