研究外泌體介導(dǎo)的microRNA的調(diào)控機制，第一步通過microRNA表達譜的檢測分析來源于肝病細胞的外泌體。第二步，應(yīng)用肝細胞和外泌體共培養(yǎng)實驗得出以下結(jié)論：來源于肝病細胞的外泌體能促進肝病細胞的生長及遷移侵襲，且外泌體有運輸microRNA至受體細胞的功能。第三步，研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個外泌體的重要調(diào)控因子，與肝病的發(fā)生有著密切的關(guān)系，Vps4A基因的表達下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關(guān)。通過microRNA高通量測序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導(dǎo)致外泌體分泌肝病相關(guān)的重要microRNA，與肝病的發(fā)生密切相關(guān)。度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高。腹膜透析液外泌體融合實驗

細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。外周血外泌體提取試劑盒外泌體的細胞源：人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體。

免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性，變性后，通過SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)，然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中?？贵w特異性識別膜表面上的抗原，然后將膜暴露于第二抗體中。通過二抗的熒光標簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團進行檢測。常用的標記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復(fù)性會受到所用抗體質(zhì)量的限制。

流式細胞技術(shù)是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應(yīng)抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細胞技術(shù)檢測時需要單顆粒懸浮液，當(dāng)外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導(dǎo)致一次觀察到多個顆粒，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準確。因此，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結(jié)合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細胞術(shù)之前，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當(dāng)樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。采用磁珠法時，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。

外泌體的提取分離方法：1、超濾離心：由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法：外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標記物、調(diào)控靶細胞功能、參與細胞生物學(xué)活動等。尿液外泌體提取試劑盒服務(wù)

外泌體可以通過多種方法給藥，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。腹膜透析液外泌體融合實驗

外泌體與免疫反應(yīng)、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中樞的神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病和病癥進展相關(guān)。由外泌體傳遞到受體細胞的蛋白質(zhì)、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應(yīng)。這種外泌體介導(dǎo)的反應(yīng)可以促進或阻止疾病。外泌體在調(diào)節(jié)復(fù)雜的細胞內(nèi)通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療控制方面具有潛在的用途，包括神經(jīng)退行性疾病和病癥。外泌體可被設(shè)計用于遞送不同的診療有效載荷，包括短干擾rna、反義寡核苷酸、化療藥物和免疫調(diào)節(jié)劑，并具有將其遞送到預(yù)期目標的能力。腹膜透析液外泌體融合實驗

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