外泌體的提取、純化和鑒定：每一個(gè)外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過(guò)形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細(xì)胞或組織，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。腹水外泌體融合實(shí)驗(yàn)外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用，活躍細(xì)胞內(nèi)通路。外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織、細(xì)胞間隙、體液中。腹水外泌體miRNA測(cè)序

外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等，同時(shí)也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。所有的細(xì)胞都能分泌外泌體，但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性，這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞，調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng)。同時(shí)，外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用；此外，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來(lái)進(jìn)行藥物遞送。外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用，活躍細(xì)胞內(nèi)通路。腹水外泌體融合實(shí)驗(yàn)外泌體可以作為“天然的納米粒子”來(lái)進(jìn)行藥物遞送。

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動(dòng)力學(xué)特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報(bào)道，并且通過(guò)生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成。基于外泌體的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。疾病的進(jìn)展和對(duì)診療的反應(yīng)也可以通過(guò)外泌體的多組分分析來(lái)確定的。

外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合，有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細(xì)胞來(lái)源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源)、CD86(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細(xì)胞）。外泌體的提取的方式：超速離心法。在凝血過(guò)程中血小板會(huì)分泌大量的外泌體，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來(lái)自額外的分泌。

外泌體的提取分離的方法：1、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過(guò)程比較費(fèi)時(shí)，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心：在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過(guò)密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時(shí)。外泌體其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。湖南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。腹水外泌體miRNA測(cè)序

研究外泌體介導(dǎo)的microRNA的調(diào)控機(jī)制，第一步通過(guò)microRNA表達(dá)譜的檢測(cè)分析來(lái)源于肝病細(xì)胞的外泌體。第二步，應(yīng)用肝細(xì)胞和外泌體共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論：來(lái)源于肝病細(xì)胞的外泌體能促進(jìn)肝病細(xì)胞的生長(zhǎng)及遷移侵襲，且外泌體有運(yùn)輸microRNA至受體細(xì)胞的功能。第三步，研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個(gè)外泌體的重要調(diào)控因子，與肝病的發(fā)生有著密切的關(guān)系，Vps4A基因的表達(dá)下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關(guān)。通過(guò)microRNA高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導(dǎo)致外泌體分泌肝病相關(guān)的重要microRNA，與肝病的發(fā)生密切相關(guān)。腹水外泌體miRNA測(cè)序

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