細胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產生特定的作用,包括新抗原呈遞、免疫調節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內吞作用、網格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內信號或融合,從而將外泌體內容物沉積到細胞質中。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應用已經涉及醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域。外泌體可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體命名
外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡,其大小為30-150nm,具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài),含有豐富的內含物(包括核酸、蛋白和脂質等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。所有的細胞都能分泌外泌體,但是不同細胞分泌的外泌體不管在數量上還是在內含物中都具有比較大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞,調控細胞生理活動。同時,外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉化、促進瘤子發(fā)生和轉移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。海洋生物外泌體tmt外泌體的存在:外泌體幾乎存在于所有的組織、細胞間隙、體液中。
超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認為是金標準,主要是根據外泌體的沉降系數、大小和形狀將其分離出來。首先4℃低速離心(300-500g,10min)去除死細胞以及細胞碎片,隨后以較高離心速度(2000xg,10min)去除生物聚合物以及凋亡小體,然后用10000xg,30min離心去除大型囊泡,結尾以超速離心沉淀外泌體。通過懸浮以及重復超速離心去除外泌體沉淀中的非外泌體蛋白。超速離心法具有操作簡單、不易被分離試劑污染、獲得的外泌體數量較多等優(yōu)點。但是此方法需要昂貴的超高速離心機,每次處理的樣本量較小,費時,電鏡鑒定時還發(fā)現外泌體易聚集成塊,且上清中仍能檢測到大型囊泡,純度不高,另外高速離心會損傷外泌體影響下游實驗。
外泌體的脂質和蛋白質組成可以影響它們的藥代動力學特性,它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力,外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經在所有的生物液體中被報道,并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復雜貨物的組成?;谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預后方面具有潛在的應用價值。疾病的進展和對診療的反應也可以通過外泌體的多組分分析來確定的。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質會對電鏡結果造成影響。
外泌體的臨床應用:間充質干細胞是目前較普遍使用的細胞類型,它具有自我更新,多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調節(jié)、來源普遍等特點,在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果。間充質干細胞來源外泌體與間充質干細胞有著相似的功能,包括修復與再生組織、阻止炎癥反應及調節(jié)機體免疫,但外泌體相對于間充質干細胞又有許多優(yōu)勢。首先,間充質干細胞來源外泌體更穩(wěn)定,更好保存,易于管理和控制,可以人為改變其內容物的種類和數量。其次,它們沒有活細胞,不會像間充質干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重;另外,它有可能避免某些針對間充質干細胞的調控問題,間充質干細胞來源外泌體有代替間充質干細胞的趨勢。從研究上來講并不太嚴格區(qū)分外泌體或微泡。江蘇CD63外泌體慢病毒
外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。外泌體命名
外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現在早期以及回收的核內體中,RAB7和RAB9主要出現在晚期的核內體?,F有大量的研究發(fā)現外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白(包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素。外泌體命名
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