為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀？答：這種問題通常有三種可能性，其一：使用的細(xì)胞上清或者血清量太低，從而造成了這樣的結(jié)果。其二：使用了不透明的超速離心管，一般來說外泌體產(chǎn)量都比較小，所以凡是不透明的管子，基本都是比較難見到明顯沉淀的，可以當(dāng)做有沉淀，然后操作下去即可。其三：使用了角轉(zhuǎn)。部分品牌離心機(jī)的角轉(zhuǎn)管壁粘附性比較低，超離結(jié)束沒多久沉淀就會滑落下去，所以請在離心結(jié)束時趕緊去收樣。外泌體的角色：1、外泌體發(fā)揮功能并一定需要受體細(xì)胞攝入外泌體：外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用，活躍細(xì)胞內(nèi)通路。2、外泌體的角色之一：細(xì)胞-細(xì)胞通訊，比如抗原遞呈。外泌體的細(xì)胞源：人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體。湖北海洋生物外泌體

被特定部位的細(xì)胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細(xì)胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細(xì)胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細(xì)胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達(dá)譜，整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān)，而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取，進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá)。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測肉瘤轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。江西外泌體lncRNA芯片外泌體膜含有MHC-1/2蛋白，能綁定特異性的肽鏈。

外泌體生物學(xué)功能：1、在心血管系統(tǒng)中，據(jù)報道，源自人胚胎干細(xì)胞（ESC）的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷；2、在免疫系統(tǒng)中，據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制；3、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)中，外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動，從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理；迄今為止，尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細(xì)胞結(jié)合的途徑。然而，比較明顯，其結(jié)合過程從外泌體識別受體細(xì)胞PM上的特定受體開始。膜受體的識別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ)，它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍，外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細(xì)胞中。

免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。首先對樣品進(jìn)行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性，變性后，通過SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)，然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中?？贵w特異性識別膜表面上的抗原，然后將膜暴露于第二抗體中。通過二抗的熒光標(biāo)簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團(tuán)進(jìn)行檢測。常用的標(biāo)記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復(fù)性會受到所用抗體質(zhì)量的限制。外泌體的直徑比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm。外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障（如細(xì)胞質(zhì)膜和血/腦屏障）的能力。

細(xì)胞外小泡通過充當(dāng)脂肪組織、肝臟、骨骼肌和免疫細(xì)胞之間的細(xì)胞間通訊方式，在肥胖及其代謝并發(fā)癥的發(fā)展中發(fā)揮作用。外泌體可能在外周胰島素敏感性的調(diào)節(jié)中起作用，外周胰島素敏感性是T2D發(fā)病機(jī)理的主要組成部分。外泌體似乎通過至少兩種不同的機(jī)制來調(diào)節(jié)胰島素敏感性，即通過調(diào)節(jié)炎癥或通過與胰島素反應(yīng)性部位的直接相互作用。后者可通過與主要胰島素信號分子（例如磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信號通路）相互作用而影響胰島素信號通路而直接或間接發(fā)生。與對照組相比，糖尿病患者的血漿EV含量更高，并且與對照組相比，糖尿病小鼠的血漿外泌體數(shù)量也更高。然而，確定外泌體的作用及其在肝/腸軸通訊中的潛在作用將需要對它們的組成有更好的了解，特別是飲食是否會改變腸源性外泌體的含量，因此就胰島素反應(yīng)而言它們的生物學(xué)功能尚未研究。電子顯微鏡下外泌體大小不一，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。福建外泌體攝取

外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織、細(xì)胞間隙、體液中。湖北海洋生物外泌體

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。2、PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。3、色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。湖北海洋生物外泌體

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