外泌體的提取分離的方法：1、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心：在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時。外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)。細(xì)胞外泌體提取試劑盒服務(wù)

全轉(zhuǎn)錄組測序的研究對象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA，主要為mRNA和lncRNA、circRNA等非編碼RNA。外泌體中攜帶有來自母本細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、短鏈RNA和長鏈RNA等重要信息。對外泌體中的長鏈RNA進行全轉(zhuǎn)錄組測序及分析，不只能夠篩選外泌體攜帶的特異Biomarker，同時對深入了解疾病或不同發(fā)育階段的內(nèi)在機制也有重要意義。外泌體全轉(zhuǎn)錄組測序體系，充分結(jié)合了微量核酸建庫技術(shù)、NGS技術(shù)和全新的生物信息序列比對算法，可實現(xiàn)對1mL血漿中的外泌體即可進行mRNA、lncRNA和circRNA等RNAs充分測序，獲取周全的外泌體轉(zhuǎn)錄組信息。上海外泌體測序外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成。

血漿中的外泌體蛋白既可以當(dāng)作標(biāo)志物，也可以進行機理研究？首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個亞組：疾病進展期和疾病慢性期。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白組，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達，可以作為CLL進展期診斷的輔助標(biāo)志物。進一步，研究人員通過生信分析發(fā)現(xiàn)進展期CLL患者外泌體中的高表達蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān)，而NF-κB通路正是承接此效應(yīng)的關(guān)鍵通路。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細(xì)胞中，證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細(xì)胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進一步活躍NF-κB通路。該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進展期CLL的標(biāo)志物，并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調(diào)控，不斷活躍進展期CLL患者自身PBMC細(xì)胞中的NF-κB通路，促進CLL進展的特殊機理。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時，量少。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域。

尺寸排阻色譜法（SEC）根據(jù)大小來分離樣本。該技術(shù)應(yīng)用了一個裝有多孔聚合物珠的色譜柱，該聚合物珠包含多個孔和通道，分子根據(jù)其直徑穿過。半徑小的分子穿過柱子的孔遷移需要較長的時間，而大分子則較早地從柱子上洗脫下來。SEC可精確分離大分子和小分子。與離心分離方法相比，SEC分離的外泌體不受剪切力的影響，剪切力可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu)。此方法分離到的外泌體純度較高，在電鏡下大小均一，但是獲取量少，所需設(shè)備特殊。此外，SEC方法與超濾相結(jié)合已被用于尿液來源的外泌體的分離和分析。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。磁珠分選出小膠質(zhì)細(xì)胞源性外泌體

外泌體的提取的方式：色譜法。細(xì)胞外泌體提取試劑盒服務(wù)

外泌體的相關(guān)成分：1、外泌體的膜同細(xì)胞一樣，是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白，能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流動，參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6、外泌體中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同時還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物質(zhì)進行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU），進行主動包埋。細(xì)胞外泌體提取試劑盒服務(wù)

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