免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質變性，變性后，通過SDS-PAGE分離蛋白質，然后將其轉移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中。抗體特異性識別膜表面上的抗原，然后將膜暴露于第二抗體中。通過二抗的熒光標簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團進行檢測。常用的標記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復性會受到所用抗體質量的限制。外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障（如細胞質膜和血/腦屏障）的能力。外泌體與細胞外囊泡的區(qū)別

外泌體作為細胞間信使較早發(fā)現(xiàn)于體外培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中，是直徑為30~150nm，密度為1.10~1.18g/ml的細胞外囊泡，攜帶豐富的遺傳信息，參與細胞信號轉導、細胞遷移、瘤子新生血管生長和瘤子微環(huán)境形成等過程。由于現(xiàn)存的分離技術是基于外泌體的大小、結構和膜蛋白的親和捕獲，比較難完全將其與其他囊泡和大分子蛋白質復合體區(qū)分開，分離出的外泌體蛋白濃度通常會被高估，并且不同亞型外泌體之間可能會有不同蛋白質特征，所以對分離的外泌體進行鑒定對于后期研究至關重要。外泌體分離柱外泌體的膜同細胞一樣，是磷脂雙分子層。

磁珠免疫法分離外泌體：將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育，使外泌體特異性結合到磁珠上形成磁珠-外泌體復合物，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主要是，珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體，從而提高了分離效率。此外，使用磁珠時，樣品起始體積沒有上限，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL，且ELISA洗脫雜質時容易造成孔間交叉污染。當將磁珠法與金標準外泌體分離方法進行比較時，磁珠法可分離出更純凈的外泌體，特異性高、速度更快，并且不需要昂貴的儀器。另外，與其他分離方法相比，磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。

流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒，從而導致數(shù)據(jù)不準確。因此，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細胞術之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞，調控細胞生理活動。

PEG沉淀法分離外泌體：通常通過將無水聚合物，如聚乙二醇（PEG），與樣品混合來沉淀外泌體。PEG聚合物競爭性結合水分子，增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力從而沉淀外泌體，然后通過離心分離外泌體。這種分離的方法快速，簡便，可用于各種起始體積（從100μL到幾毫升）適合于各種研究和臨床設定。然而，這種方法缺乏選擇性，PEG聚合物不只會導致外泌體小泡沉淀，還會引起其他細胞外囊泡、細胞外蛋白質和蛋白質聚集體沉淀。因此，在使用這種方法之前，必須進行樣品預處理，例如過濾或超速離心，以減少較終的外泌體制劑的污染。外泌體具有異質性，即使是同一種細胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別。干細胞提取試劑盒

外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠洸。┓矫娴臐摿?。外泌體與細胞外囊泡的區(qū)別

外泌體的臨床應用：間充質干細胞是目前較普遍使用的細胞類型，它具有自我更新，多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調節(jié)、來源普遍等特點，在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果。間充質干細胞來源外泌體與間充質干細胞有著相似的功能，包括修復與再生組織、阻止炎癥反應及調節(jié)機體免疫，但外泌體相對于間充質干細胞又有許多優(yōu)勢。首先，間充質干細胞來源外泌體更穩(wěn)定，更好保存，易于管理和控制，可以人為改變其內容物的種類和數(shù)量。其次，它們沒有活細胞，不會像間充質干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重；另外，它有可能避免某些針對間充質干細胞的調控問題，間充質干細胞來源外泌體有代替間充質干細胞的趨勢。外泌體與細胞外囊泡的區(qū)別

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