與DNA不同,RNA一般為單鏈長分子,不形成雙螺旋結(jié)構(gòu),但是很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結(jié)構(gòu)乃至三級結(jié)構(gòu)來行使生物學功能。RNA的堿基配對規(guī)則基本和DNA相同,不過除了A-U、G-C配對外,G-U也可以配對。在細胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉(zhuǎn)運RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場所??俁NA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實驗操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。徐州RNA提取試劑直銷廠家
RNA提?。侯A(yù)備工作RNA酶(Rnase)是導致RNA降解較主要的物質(zhì)。此酶非常穩(wěn)定,在一些極端的條件下只可暫時失活,但限制因素去除后又迅速恢復(fù)活性。常規(guī)高溫高壓滅菌方法和蛋白壓制劑不能使所有的Rnase完全失活。1.它普遍存在于人的皮膚上,因此制備RNA時必須戴手套。2.RNase的又一污染源是取液器。根據(jù)取液器制造商的要求對取液器進行處理。一般情況下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內(nèi)部和外部,可基本達到要求。3.塑料制品、玻璃和金屬物品的處理。廈門石家莊RNA提取試劑快速程序在25-40分鐘內(nèi)提供高質(zhì)量的總RNA。
RNA提?。侯A(yù)備工作(1)塑料制品:盡量使用一次性無菌塑料制品。已標明RNase-free的塑料制品,如沒有開封使用過,通常不必再處理。處理的步驟如下:O在玻璃燒杯中注入去離子水,加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二乙基焦碳酸酯為活性很強的劇毒物,須在通風櫥中小心使用)O將待處理的塑料制品放入一個可以高溫滅菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通風柜中37℃或室溫下處理過夜。O將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中,將裝有DEPC-H2O處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口,高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。O滅菌塑料制品烘烤干燥,置潔凈處備用。(2)玻璃和金屬物品250℃烘烤3小時以上。
總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實驗操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍普遍,可以從動物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細胞等樣品中提取總RNA。該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會分成三層:上層無色水相、中間層和下層紅色有機相,RNA分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學常規(guī)實驗,如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等。提取的RNA樣品中不應(yīng)存在對酶存在壓制作用的有機溶劑及過高濃度的金屬離子。
細胞RNA提取的方法:實驗提取步驟:標準Trizol提取步驟為液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。將細胞培養(yǎng)皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分鐘,用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進口EP管中。加入1/5體積的氯仿,上下混勻液體,4度靜置10-15分鐘。(氯仿為有機溶劑,有效的使有機相和無機相迅速分離。有機相中主要是酚和蛋白結(jié)合,從而使得蛋白和RNA脫離,RNA進入水相)。4度離心15分鐘,一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層,RNA在上清里,從離心機輕輕拿出EP管,以免管內(nèi)物質(zhì)震蕩導致下層沉淀激起。吸取上清的時候一定要動作輕柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下層沉淀,將液體置于新的EP管中。加入等體積異丙醇,4度靜置10min,然后12000rpm離心10min。血漿/血清RNA提取試劑盒:總RNA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。廈門RNA提取試劑產(chǎn)品介紹
細菌總RNA提取試劑盒:提取的總RNA純度高,沒有DNA和蛋白質(zhì)污染,適用于RT-PCR。徐州RNA提取試劑直銷廠家
昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。加0.7mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。加0.3mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。此步可以省略。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50~100μLRNA洗脫液,室溫放置1~2分鐘。12000rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用。徐州RNA提取試劑直銷廠家
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...