細胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預(yù)實驗，比如：HeLa，293，CHO，COS7，MCF－7，HepG2等細胞，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的，有些細胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響。轉(zhuǎn)染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基，其一因為普通轉(zhuǎn)染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉(zhuǎn)染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉(zhuǎn)染后可適時加入。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細胞的優(yōu)勢生長，過晚會引起較多細胞死亡?？蓪崟r觀察1/5細胞變圓的時候加入血清細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素。北京細胞高效轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹

轉(zhuǎn)染的注意事項：用于蛋白生產(chǎn)的細胞的轉(zhuǎn)染可以在添加有血清或無血清培養(yǎng)基中進行。但更傾向于使用無血清培養(yǎng)基表達蛋白，因為血清蛋白會干擾下游表達蛋白的純化。無血清培養(yǎng)基一般針對某一特定細胞類型優(yōu)化并有幾類無血清培養(yǎng)基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培養(yǎng)基低得多）。無蛋白培養(yǎng)基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化學(xué)成分的培養(yǎng)基不含有蛋白或未知組成的成分。多種多樣的配方使您可以選擇較適合您應(yīng)用的一種。在含血清時轉(zhuǎn)染的細胞可以適應(yīng)無血清培養(yǎng)基，無蛋白培養(yǎng)基或限定化學(xué)成分的培養(yǎng)基。在部分情況下（如293-F，293-H，COS-7和CHO-S），對于已適應(yīng)無血清或無蛋白培養(yǎng)基的細胞，可以使用其培養(yǎng)基進行轉(zhuǎn)染。其他一些無血清培養(yǎng)基包含克制陰離子脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的成分，在這些情況下，有必要在諸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。廈門細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨蛋白表達和培養(yǎng)基的選擇哺乳動物細胞系合成可溶的。

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.準(zhǔn)備不足做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的時候，在開展正式實驗前要多做預(yù)試驗，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：脂質(zhì)體的用量、DNA密度、細胞密度、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉(zhuǎn)的時候，如果電壓太大，往往會發(fā)生細胞大量死亡的情況。不同的細胞，需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預(yù)實驗，多摸索條件。對于大多數(shù)細胞來說，其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外，就是進行轉(zhuǎn)染的細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。處于對數(shù)生長期的細胞的抗損傷能力是較強的。細胞濃度應(yīng)該處于5x106到1x107／mL之間。每次轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒應(yīng)該控制在4-6μg，如果﹥10μg，轉(zhuǎn)染效率也較大降低。電擊后，應(yīng)該將DNA和細胞混合液在室溫下放置10分鐘，使細胞恢復(fù)損傷。

如何提高細胞轉(zhuǎn)染效率：1.組織培養(yǎng)試劑優(yōu)化細胞生長條件。只使用新鮮配制的培養(yǎng)基和添加劑，并經(jīng)可能減少所用試劑的變更。基礎(chǔ)培養(yǎng)基—目前所使用的各種市售培養(yǎng)基(如，RPMI1640和DMEM)。培養(yǎng)基的成分包括營養(yǎng)物質(zhì)(氨基酸，葡萄糖)，維生素，無機鹽，和緩沖物質(zhì)。有些成分非常不穩(wěn)定，因此如果不在使用時新鮮加入就可能會產(chǎn)生問題。務(wù)必要使培養(yǎng)基避光保存。因為已知有一些組分和緩沖物質(zhì)，如HEPES，當(dāng)暴露于光照下就會分解產(chǎn)生細胞毒性物質(zhì)。另外，血清，添加劑，來自于培養(yǎng)箱內(nèi)的污染物、化學(xué)物質(zhì)，或/細胞的污染也都可能影響到細胞生理。2.細胞生長狀態(tài)密切觀察您的細胞;確保它們狀態(tài)良好。在開始轉(zhuǎn)染細胞之前，先制定一個適當(dāng)?shù)姆N板方案，使細胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持較佳狀態(tài)。增加成功幾率—細胞是轉(zhuǎn)染過程中的一個關(guān)鍵元素，它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的較重要的變量。較適合轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到對數(shù)生長期的細胞。

細胞轉(zhuǎn)染效率影響因素：1.細胞密度一般來說，當(dāng)細胞密度達到60%～80%時進行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率，過低或過高都會影響轉(zhuǎn)染效果。2.細胞生長狀態(tài)這點非常關(guān)鍵，很多時候傳代次數(shù)太少或者太多都將導(dǎo)致細胞對轉(zhuǎn)染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性、降低細胞毒性，應(yīng)盡量使用適度傳代的細胞系，并在不同次實驗時保持細胞傳代次數(shù)的一致性。3.細胞種類不同細胞種類的細胞在做轉(zhuǎn)染時所需要的轉(zhuǎn)染體系是不同的，不能一種體系用在所有類型細胞的轉(zhuǎn)染實驗對于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會因細胞密度而異。長沙細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買

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細胞轉(zhuǎn)染的常用方法：細菌轉(zhuǎn)染：原理：對于用脂質(zhì)體不能實現(xiàn)轉(zhuǎn)染的細胞，可以采用細菌轉(zhuǎn)染?？捎糜诘鞍踪|(zhì)過表達或克制，是臨床研究中較常用的方法。它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉(zhuǎn)染細胞、原代細胞的穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染。實驗步驟：通過基因克隆生成重組細菌→采用非細菌法轉(zhuǎn)染包裝細胞系，擴增并分離得到重組細菌顆粒→純化并滴定細菌液→轉(zhuǎn)導(dǎo)目的細胞（含有細菌特異性的受體）→去除培養(yǎng)物中的細菌，并加入新鮮培養(yǎng)基→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。北京細胞高效轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹