鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境，使細胞在三維環(huán)境中生長。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上，pH左右時可形成具有一定強度的三維膠，檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法：1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無菌下制備，純度達到95%以上。成都正規(guī)鼠尾膠原

鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司)；多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈，用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開，去掉皮毛，并剪成小段，抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中，用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液，將肌鍵置于平皿中剪碎，按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃，將肌鍵分散于醋酸溶液中，4℃放置一周，然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下，肌腱水解成膠凍狀凝膠，置于冰箱4℃保存。南京鼠尾膠原哪里買將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B．含細胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意事項：在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白。

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL，用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中，倒入0.5mL自組裝液，室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中，將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL；滴加1mol/L的氯化氫，調(diào)節(jié)酸堿度至7.4，然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉)，約16滴/min。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。唐山正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家

鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便。成都正規(guī)鼠尾膠原

具體實施方式實施例1止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為0.2%0.2%。余量為水。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)小板，-40°C預(yù)凍池，再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍4h，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥10h，即可以得到復(fù)合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌，干燥保存。凍干的材料可直接用于各種傷口的止血。實施例2止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為5%2%1%，余量為水。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)板，-20°C預(yù)凍，再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍8h，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥30h，即可以得到復(fù)合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌，干燥保存。成都正規(guī)鼠尾膠原