鼠尾Ⅰ型膠原:材料與方法:1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司);多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開,去掉皮毛,并剪成小段,抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中,用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,將肌鍵置于平皿中剪碎,按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,將肌鍵分散于醋酸溶液中,4℃放置一周,然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下,肌腱水解成膠凍狀凝膠,置于冰箱4℃保存。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。I型膠原蛋白分布非常普遍,是主纖維束的主要成分。北京鼠尾膠原直銷價
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。成都鼠尾膠原廠家批發(fā)價制備鼠尾膠原(兩個同學(xué)一組操作)。
一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心,簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,并采用檸檬酸替代醋酸進行提純。從提取原料到樣品生成過程中,進行多次真空冷凍干燥,并經(jīng)進一步處理獲得含水率在3%以下的膠原蛋白微粉;較后由滅菌、無菌包裝,成品膠原蛋白粉末的純度在98%以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了產(chǎn)率和生物相容性,降低了成本,適用于生物醫(yī)用材料。
鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,它具有促進體外培養(yǎng)細胞(特別是上皮細胞)貼壁的作用,同時它也是一種天然的黏附劑,當我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,制備細胞爬片時,可在瓶底涂一層膠原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。通過本實驗可掌握鼠尾膠原的制備方法,以及如何切割小玻片,并利用鼠尾膠原將其固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。實驗設(shè)備及材料:大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養(yǎng)瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。實驗內(nèi)容:1、制備鼠尾膠原。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細胞膜片鉗實驗中的促進毛細胞貼壁效果。
鼠尾膠原膠凝程序:膠原蛋白I按以下步驟使其pH達到堿性時凝膠。1)將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和,把蓋子放在150mm的培養(yǎng)皿上,暫放置一邊。2)將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上,厚度可以根據(jù)需要改變,膠原蛋白I(50-100μL)足以涂覆22mm的蓋玻片。對于直徑100mm的培養(yǎng)皿,每個加入約6mL;對于60mm培養(yǎng)皿添加約2.3mL,對于35mm培養(yǎng)皿添加約1mL。3)將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。4)在無菌蒸餾水中(35mm培養(yǎng)皿加5mL,60mm培養(yǎng)皿加10mL等)浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無菌蒸餾水,放置在層流罩中過夜。5)吸出蒸餾水,用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。鼠尾膠原醋酸溶解:氯仿的量約為膠原溶液的10%。金華鼠尾膠原哪家好
制備鼠尾膠原:將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡。北京鼠尾膠原直銷價
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血的優(yōu)點:1、本發(fā)明制作的止血材料采用溫和的冷凍干燥操作工藝不光光提高了生產(chǎn)效率,同時避開了使用其他設(shè)備帶來的成本上升問題。2、本發(fā)明專利生產(chǎn)的止血材料(止血海綿),其動物實驗表明其具有非常好的止血效果。也可應(yīng)用于內(nèi)臟出血。具有廣闊的應(yīng)用前景。3、本發(fā)明制備的止血材料具有可完全被人體吸收,與出血創(chuàng)面一接觸,其接觸面迅速形成凝膠而粘附在出血創(chuàng)面上,外面則形成連續(xù)的壓迫干層。啟動凝血因子。同時,聚乙烯醇為成膜材料,兩種的協(xié)同效應(yīng)形成了一種理想的止血狀態(tài)和結(jié)構(gòu)。北京鼠尾膠原直銷價
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...