無血清細(xì)胞凍存液：凍存注意：開蓋之前，用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身。以下說明適用于在6孔板內(nèi)的培養(yǎng)物的凍存。培養(yǎng)物應(yīng)該在適合傳代的時(shí)候進(jìn)行收集和凍存。每管所含有的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)來源于6孔板的1個(gè)培養(yǎng)孔。如果使用其他的培養(yǎng)器皿，請相應(yīng)的調(diào)整體積。1.在室溫（15-25°C）以300xg離心5分鐘。2.輕輕吸走上清液，注意不要擾動(dòng)細(xì)胞團(tuán)。3.用血清學(xué)吸管以1mL的TBD-698重懸細(xì)胞。在打散細(xì)胞團(tuán)時(shí)，盡量減少細(xì)胞聚集體分解。4.用2mL的血清學(xué)吸管將1mL的細(xì)胞聚集體轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的凍存管中。5.用以下方法凍存細(xì)胞聚集體:推薦使用緩速降溫方法，每分鐘降低1度，隨后可以在-196°C液氮長期保存。不推薦在-80°C長期保存。逐步降溫法：-20°C保存2個(gè)小時(shí)，然后-80°C中保存2個(gè)小時(shí)，隨后可以在-196°C液氮中長期保存。無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品特色：即用型，無需現(xiàn)配，即開即用。蕪湖太原無血清細(xì)胞凍存液

無血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：選擇凍存處于對數(shù)生長期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。2.按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細(xì)胞凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細(xì)胞混合液。5.將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱，長期冷凍保存。7.若研究者需要液氮保存時(shí)，可將完全凍結(jié)的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐。蕪湖無血清細(xì)胞凍存液廠家供應(yīng)無血清細(xì)胞凍存液存儲(chǔ)條件：為避免重復(fù)凍融過程可能導(dǎo)致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低。

細(xì)胞凍存，我們應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)：凍存細(xì)胞的效果好壞要看細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的存活率。細(xì)胞凍存時(shí)，細(xì)胞內(nèi)部會(huì)產(chǎn)生晶體，水凝固形成的高濃度溶質(zhì)會(huì)對細(xì)胞產(chǎn)生損傷，所以在凍存過程中要盡可能降低晶體的產(chǎn)生。為了提高復(fù)蘇存活率，可通過以下方法完成：a）降溫的速度不能太快，讓細(xì)胞內(nèi)的水分緩慢離開細(xì)胞；b）在低溫環(huán)境下凍存細(xì)胞可以降低高濃度鹽對細(xì)胞中蛋白質(zhì)的影響；c）凍存試劑要采用親水的低溫保護(hù)劑；d）復(fù)蘇時(shí)的速度要快，這樣可以減少細(xì)胞內(nèi)部冰晶溶解時(shí)產(chǎn)生的某些可溶性成分。

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則：慢凍速融，這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生，從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH，電解質(zhì)等的改變，進(jìn)而促使細(xì)胞死亡。細(xì)胞凍存液除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液.細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化?？焖賰龃婧喕藘龃娌襟E，同時(shí)不需要使用梯度凍存盒。

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞凍存的原理：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。無血清細(xì)胞凍存液用于T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲(chǔ)。廈門成都無血清細(xì)胞凍存液

無血清快速細(xì)胞凍存液：減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細(xì)胞安全。蕪湖太原無血清細(xì)胞凍存液

無血清細(xì)胞凍存液的操作規(guī)范：1、培養(yǎng)細(xì)胞至對數(shù)生長晚期，顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無污染等。選擇狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作(注：貼壁生長細(xì)胞，用胰蛋白酶消化并用完全培養(yǎng)基終止消化，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù);懸浮生長細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù))。2、500～1000g離心5min，棄上清。3、加入適量的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1～10×106/ml，置于凍存管中密閉。4、采取逐級(jí)降溫保存：4℃放置20min，-20℃放置30min，-70℃過夜，置于液氮罐中長期存儲(chǔ)。注意：務(wù)必超凈工作臺(tái)內(nèi)無菌操作，避免污染。雜交瘤細(xì)胞凍存時(shí)應(yīng)定期復(fù)蘇，以檢查細(xì)胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性。蕪湖太原無血清細(xì)胞凍存液