無(wú)血清細(xì)胞凍存:在細(xì)胞培養(yǎng)中,細(xì)胞凍存是較關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一,尤其在細(xì)胞治好、細(xì)胞存儲(chǔ)中對(duì)細(xì)胞凍存更有特殊要求,下面就根據(jù)降溫速度以及凍存液組分對(duì)細(xì)胞凍存做詳細(xì)介紹。根據(jù)降溫速度區(qū)分,細(xì)胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。根據(jù)凍存方式不同可以分為慢速凍存(程序降溫法)與快速凍存(非程序降溫法)。程序降溫凍存技術(shù)要點(diǎn)是慢凍,標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2/℃min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min。之前,常用的傳統(tǒng)方法是將凍存管置于4℃30分鐘--20℃60分鐘--80℃過(guò)夜-液氮罐。不過(guò),由于步驟較多,間隔時(shí)間又長(zhǎng),很容易遺忘。之后,人們也開始使用程序降溫盒。將凍存管放入程序降溫盒中,再將程序降溫盒放入-80℃冰箱。以1℃/min的速度進(jìn)行降溫。PH,電解質(zhì)等的改變,進(jìn)而促使細(xì)胞死亡。正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品介紹
無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品用途:1.無(wú)血清細(xì)胞凍存液可用于造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等干細(xì)胞的儲(chǔ)存。2.無(wú)血清細(xì)胞凍存液可用于T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲(chǔ)。3.無(wú)血清細(xì)胞凍存液可用于其他類型哺乳動(dòng)物細(xì)胞的儲(chǔ)存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品原理:無(wú)血清細(xì)胞凍存液,含多種保護(hù)劑成分。一些保護(hù)劑,易于穿透細(xì)胞,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,減少陽(yáng)離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量,無(wú)血清細(xì)胞凍存液,為多種保護(hù)劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),較大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率。寧波無(wú)血清細(xì)胞凍存液價(jià)格無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能:2-8℃即可穩(wěn)定保存,無(wú)需冷凍,即取即用。
冷凍速率:冷凍速率是指降溫的速度,直接關(guān)系到冷凍效果。冷凍速度不同,細(xì)胞內(nèi)水分向外流動(dòng)的情況也不相同,不同的冷凍速度既然能使細(xì)胞內(nèi)發(fā)生不同的生理變化,也可以對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生不同的損傷。超快速玻璃化冷凍對(duì)細(xì)胞存活來(lái)說(shuō)是較為理想的冷凍方法。細(xì)胞內(nèi)外呈玻璃化凝固,無(wú)冰晶形成或形成很小的冰晶,對(duì)細(xì)胞膜和細(xì)胞器不致造成損傷,細(xì)胞也不會(huì)在高濃度的溶質(zhì)中長(zhǎng)時(shí)間暴露而受損。不同細(xì)胞的較適冷凍速率不同。小鼠骨髓干細(xì)胞、酵母、人紅細(xì)胞的較適冷凍速率分別為1.6℃/min、7℃/min和200℃/min。細(xì)胞與細(xì)胞之間的較適冷凍速率可在1.6℃~300℃/min,故對(duì)一種細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存之前,首先需要測(cè)定其較適冷凍速率,以保證獲得較高的冷凍存活率。
凍存細(xì)胞注意事項(xiàng):凍存細(xì)胞系以備將來(lái)之用時(shí),必須遵守以下原則。我們建議您嚴(yán)格遵守您所用細(xì)胞系附帶的操作說(shuō)明,以便獲得較佳結(jié)果。在細(xì)胞處于生長(zhǎng)期密度達(dá)到70-90%的情況下進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,并且細(xì)胞傳代盡可能靠前。確保凍存前活細(xì)胞百分比至少為90%。請(qǐng)注意較佳凍存條件取決于所用細(xì)胞系。細(xì)胞應(yīng)緩慢冷凍,可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器,使溫度每分鐘大約降低1°C。必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO或者甘油等冷凍保護(hù)劑無(wú)血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì):無(wú)血清細(xì)胞凍存液是不含血清和動(dòng)物源成分。
年連續(xù)三年成為新賽美全產(chǎn)品線中“受客戶喜歡的科研產(chǎn)品”“無(wú)血清細(xì)胞凍存液關(guān)鍵技術(shù)及產(chǎn)業(yè)化”項(xiàng)目成功入圍“2017年?yáng)|吳科技創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)人才計(jì)劃“3優(yōu)勢(shì)分析傳統(tǒng)凍存液CELLSAVING成分“血清+培養(yǎng)基+dmso”四大類,成分明確,不含血清安全性1、微生物污染風(fēng)險(xiǎn)2、批次不穩(wěn)定1、無(wú)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)險(xiǎn)2、批次穩(wěn)定操作1、4℃(40min)→20℃(30min)→80℃→液氮2、程序性降溫盒(多人共用;異丙醇)直接凍于-80℃冰箱,長(zhǎng)期保存效果活率偏低,批次有差異,不適用無(wú)血清細(xì)胞凍存90%以上,復(fù)蘇后幾乎看不到死細(xì)胞無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于其他類型哺乳動(dòng)物細(xì)胞的儲(chǔ)存。寧波無(wú)血清細(xì)胞凍存液價(jià)格
同時(shí)血清中未知成分和細(xì)菌等傳染物質(zhì)會(huì)給凍存帶來(lái)影響與風(fēng)險(xiǎn)。正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品介紹
細(xì)胞凍存液的操作步驟:1.配置含10%DMSO或凡士林、10~20%小牛血清的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液;2.取對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的體細(xì)胞,除去舊細(xì)胞培養(yǎng)液,用PBS清理。3.除去PBS,添加適量蛋白酶(遮蓋細(xì)胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長(zhǎng)發(fā)育的體細(xì)胞消化吸收出來(lái);4.抽濾1000rpm,5min;5.除去蛋白酶,添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液,用塑料吸管輕輕地吹打使體細(xì)胞勻稱,記數(shù),調(diào)整凍存液中體細(xì)胞的較后相對(duì)密度為5牙周106/ml~1牙周107/ml;6.將體細(xì)胞分裝進(jìn)凍存管中,每管1~1.5ml;7.在凍存管上標(biāo)出體細(xì)胞的名字,凍存時(shí)間及作業(yè)者;8.凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序流程為減溫速度-1~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃下列時(shí),可升至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可快速滲入液態(tài)氮中。正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品介紹
細(xì)胞凍存液的配制可選用10%的DMSO加上90%的小牛血清,可以現(xiàn)用現(xiàn)配。除了這個(gè)方式,還可選擇20%的DMSO機(jī)上80%的小牛血清,配成兩倍的儲(chǔ)存液,在使用時(shí)細(xì)胞懸液和凍存液按照1:1的比例混勻使用,特別的方便。凍存液可直接置于-20攝氏度的環(huán)境中保存。使用細(xì)胞凍存液需要注意以下幾點(diǎn):1、在使用凍存液前,需要確保細(xì)胞凍存液已經(jīng)完全融化,并要輕輕的混勻。對(duì)融化后的細(xì)胞凍存液要置于4℃的環(huán)境中保存。2、使用凍存液之前應(yīng)該確保凍存前的細(xì)胞生長(zhǎng)情況比較良好,比如說(shuō)細(xì)胞需要處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,并且凍存的時(shí)候存活率大于90%。3、在使用細(xì)胞凍存液期間,為了保證可以發(fā)揮較佳的效果,建議將細(xì)胞凍存在液氮之中,這...