無(wú)血清細(xì)胞凍存液：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中的重要技術(shù)，細(xì)胞凍存是細(xì)胞長(zhǎng)期保存的重要手段。細(xì)胞凍存液，作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液，其作用是將需要凍存的細(xì)胞懸浮于凍存液，供給細(xì)胞生命代謝所必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)可以防止或減少冷凍冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷作用。在現(xiàn)有技術(shù)中，一般使用培養(yǎng)基、血清和二甲亞砜(DMSO)按照一定比例混合的方法來(lái)凍存細(xì)胞，DMSO用量為10％，過(guò)低的DMSO濃度會(huì)導(dǎo)致凍存效果欠佳，但高濃度的DMSO有較大毒性，會(huì)對(duì)細(xì)胞體造成傷害；且傳統(tǒng)凍存液配方中所使用的血清成本高，增加動(dòng)物病原污染的可能性。此外，有研究表明長(zhǎng)期與胎牛血清接觸的細(xì)胞會(huì)對(duì)溶液介質(zhì)中的胎牛血清發(fā)生內(nèi)吞，內(nèi)吞胎牛血清后的間充質(zhì)干細(xì)胞有可能發(fā)生某些蛋白表達(dá)的變化，應(yīng)用于人體后可發(fā)生異種動(dòng)物蛋白引起的免疫反應(yīng)，不能直接用于臨床輸注。因此，利用含有血清的凍存液凍存的細(xì)胞會(huì)給臨床使用帶來(lái)一定的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞。成都正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家

干細(xì)胞無(wú)血清凍存液操作事項(xiàng)：使用說(shuō)明：1.細(xì)胞消化和計(jì)數(shù)，用胰酶對(duì)待凍存的細(xì)胞進(jìn)行消化，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。2.1000轉(zhuǎn)/min離心5分鐘（4℃），去掉上清。3.根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)的情況，加入適量的干細(xì)胞無(wú)血清凍存液，使細(xì)胞密度在1×106左右（或根據(jù)自己希望達(dá)到的細(xì)胞密度）。4.輕輕地重懸細(xì)胞（務(wù)必重懸均勻）。5.將重懸的細(xì)胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標(biāo)記或者貼上標(biāo)簽）中，旋緊凍存管蓋。6.將凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃。7.第二天將細(xì)胞從-80℃轉(zhuǎn)移到液氮中。注意事項(xiàng)：1.用處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。2.控制好胰酶的消化時(shí)間，切記消化過(guò)度，會(huì)影響復(fù)蘇效果。3.重懸細(xì)胞的過(guò)程中，請(qǐng)務(wù)必要輕柔，以免損傷細(xì)胞，但同時(shí)也一定要充分重懸，這樣細(xì)胞在復(fù)蘇時(shí)才不會(huì)成團(tuán)。4.細(xì)胞操作請(qǐng)注意無(wú)菌。蕪湖昆明無(wú)血清細(xì)胞凍存液1000 rmp離心5分鐘，去除離心管中的上清液，收集細(xì)胞沉淀。

無(wú)血清細(xì)胞凍存液凍存雜交瘤細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)：簡(jiǎn)單、方便、快捷。1.即用型，無(wú)需現(xiàn)配，可直接使用。2.可孔板原位凍存，可微量?jī)龃妫瑹o(wú)需使用凍存管。3.無(wú)需程序降溫，可直接放置-80℃凍存，操作簡(jiǎn)單。4.不含血清，較大減少細(xì)胞污染。5.因不含血清，批次間差異小。6.無(wú)需液氮，-80℃冰箱長(zhǎng)期凍存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液凍存雜交瘤細(xì)胞的方法：1.驗(yàn)證陽(yáng)性克隆的細(xì)胞培養(yǎng)孔，將培養(yǎng)基上清小心吸取干凈；2.加入適量Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液，充分浸潤(rùn)細(xì)胞（無(wú)需消化細(xì)胞）；3.蓋上蓋板，直接放入-80℃冰箱，長(zhǎng)期冷凍保存。

細(xì)胞凍存液是如何保護(hù)細(xì)胞的：當(dāng)溫度進(jìn)一步下降，細(xì)胞內(nèi)外都結(jié)冰，產(chǎn)生冰晶損傷。但是如果在溶液中加入冷凍保護(hù)劑，則可保護(hù)細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。因?yàn)槔鋬霰Ｗo(hù)劑容易同溶液中的水分子結(jié)合，從而降低冰點(diǎn)，減少冰晶的形成，并且通過(guò)其摩爾濃度降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，使細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷，細(xì)胞得以在較低溫條件下保存。在復(fù)蘇時(shí)，一般以很快的速度升溫，1-2分鐘內(nèi)即恢復(fù)到常溫，細(xì)胞內(nèi)外不會(huì)重新形成較大的冰晶，也不會(huì)暴露在高濃度的電解質(zhì)溶液中過(guò)長(zhǎng)的時(shí)間，從而無(wú)冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生，凍存的細(xì)胞經(jīng)復(fù)蘇后仍保持其正常的結(jié)構(gòu)和功能。無(wú)血清凍存液用途：本產(chǎn)品請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用，超過(guò)保質(zhì)期，必須放棄使用。

無(wú)血清細(xì)胞凍存液與含血清細(xì)胞凍存液對(duì)比：傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液是使用培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，統(tǒng)稱(chēng)為含血清細(xì)胞凍存液。含血清細(xì)胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)（或隔夜），較后才移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期的儲(chǔ)存?？梢?jiàn)，含血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞時(shí)遇到的問(wèn)題：1.凍存細(xì)胞時(shí)需現(xiàn)配凍存液(如購(gòu)買(mǎi)市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液，此步可省略)。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣，耗時(shí)耗力。3.含血清，細(xì)胞污染(病毒、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高。4.血清批次、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存，且不能原位（如孔板）凍存。無(wú)血清凍存液使用方法：將凍存管直接轉(zhuǎn)移至-80C水箱中冷凍保存。重慶正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液銷(xiāo)售廠家

含血清，細(xì)胞污染(細(xì)菌、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高。成都正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家

細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞進(jìn)行保種并長(zhǎng)期保存的常用方法，其中細(xì)胞凍存液，作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液，不光光是說(shuō)只是用來(lái)進(jìn)行細(xì)胞的保存，在細(xì)胞的購(gòu)買(mǎi)、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送過(guò)程中也起著關(guān)鍵作用，因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要。如果不加任何條件直接凍存細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH值改變、蛋白變性等，從而引起細(xì)胞死亡。而細(xì)胞凍存液就相當(dāng)于細(xì)胞的保護(hù)劑，在凍存細(xì)胞時(shí)將細(xì)胞懸浮于凍存液中，可使冰點(diǎn)降低，提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞，可以防止或減少冷凍冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷作用。這樣就使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，在需要時(shí)直接復(fù)蘇就可恢復(fù)細(xì)胞活性。成都正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家