瞬時轉染和轉染效率的監(jiān)測：基因的瞬時表達在24-72小時內就結束了。這種快速的瞬時表達非常適用于驗證質粒表達和監(jiān)測轉染步驟的效率?？梢允褂脠蟾婊騺泶_定優(yōu)化條件，其表達蛋白易檢測，在目的細胞中不含此蛋白或水平很低。常用的報告基因包括氯霉素乙酰轉移酶（CAT），綠色熒光蛋白（GFP），熒光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用簡單的非同位素方法檢測b-gal的表達以測定轉染效率和活性。pCMVSPORT-bgal質粒包含CMV啟動子調控下的LacZ基因，轉染入真核細胞內后可以直接表達bgal。結合簡單的檢測步驟，可以做為監(jiān)測轉染條件的一種方便靈敏的方法。轉染試劑與細胞不匹配細胞轉染較適合的不是原代細胞。天津正規(guī)細胞高效轉染試劑平均價格

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當年做轉染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗，盡量使用開封半年內的，因為過了半年后，就算沒有過失效期，但是細胞毒性較大增加，而轉染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈。2.未加血清轉染后未及時加入血清，會導致細胞大量死亡。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候，較好不要換液，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清。過早的話，會引起未轉染的細胞瘋狂生長。金華正規(guī)細胞高效轉染試劑生產(chǎn)廠家一類是瞬時轉染，一類是穩(wěn)定轉染（很長轉染）。

細胞轉染實驗簡介：實驗材料與器材：1、材料293T細胞、MyoD表達質粒和EGFP表達質粒、DMEM培養(yǎng)基、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液、轉染試劑(TransFast)2、器材20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸、血球計數(shù)板、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱、臺式離心機、35mm培養(yǎng)皿、轉染管、15ml離心管、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD。利用脂質體轉染法較重要的就是防止其毒性，因此脂質體與質粒的比例，細胞密度以及轉染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉染條件對于效率的提高有巨大的作用。

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.準備不足做脂質體轉染的時候，在開展正式實驗前要多做預試驗，優(yōu)化轉染條件。優(yōu)化轉染條件包括：脂質體的用量、DNA密度、細胞密度、脂質體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉的時候，如果電壓太大，往往會發(fā)生細胞大量死亡的情況。不同的細胞，需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預實驗，多摸索條件。對于大多數(shù)細胞來說，其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外，就是進行轉染的細胞應該處于對數(shù)生長期。處于對數(shù)生長期的細胞的抗損傷能力是較強的。細胞濃度應該處于5x106到1x107／mL之間。每次轉染的質粒應該控制在4-6μg，如果﹥10μg，轉染效率也較大降低。細胞易于生長到高密度并合成更多蛋白。

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當年做轉染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗，盡量使用開封半年內的，因為過了半年后，就算沒有過失效期，但是細胞毒性較大增加，而轉染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈。2.未加血清轉染后未及時加入血清，會導致細胞大量死亡。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候，較好不要換液，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。無錫深圳細胞高效轉染試劑

大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細胞分裂而稀釋。天津正規(guī)細胞高效轉染試劑平均價格

細胞轉染的注意事項：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩(wěn)定轉染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量。天津正規(guī)細胞高效轉染試劑平均價格

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