外泌體的提取方法:1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等。外泌體提?。好庖叻蛛x技術。廈門外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷。太原正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷外泌體提?。翰钏匐x心。差速離心仍然是較常見的外泌體分離技術之一。
研究探討了外泌體是否可以作為RNAi的有效載體的可能性。與脂質(zhì)體和其他合成藥物納米顆粒載體不同,外泌體含有可能增強內(nèi)吞作用的跨膜和膜錨定蛋白,從而促進其內(nèi)容物的遞送。CD47是外泌體蛋白質(zhì)之一,是一個普遍表達的整合素相關跨膜蛋白,其部分功能可以保護細胞免受吞噬作用。CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα,也稱為CD172a)的配體,CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號,從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖,增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用,但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性。研究人員發(fā)現(xiàn),CD47和病基因KRAS驅(qū)動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性。所以,外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期。
外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu),天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細胞在內(nèi)幾乎所有類型的細胞(免疫細胞、神經(jīng)細胞、干細胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細胞來源相關的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞,也可運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至細胞器進入受體細胞,參與細胞間通訊。Exosome在免疫應答、炎癥反應、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關鍵作用,不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,可作為多種疾病的早期診斷標記物,也能作為靶向藥物的載體進行疾病外泌體的提取方法:磁珠免疫法。
密度梯度離心法該方法由于比較繁瑣,用的較少。原理是:像所有的脂質(zhì)小囊泡一樣,外泌體可以懸浮于特定密度梯度的蔗糖中,其密度范圍1.13g/ml-1.21g/ml,將要分離外泌體的樣本液體置于梯度蔗糖介質(zhì)上,隨后通過離心將外泌體分離。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時,對離心時間極為敏感。具體步驟是:收集培養(yǎng)2d的上清液。將培養(yǎng)上清液先以1500r/min離心5min除去細胞及碎片,再依次以1000×g離心10min取上清,10000×g離心30min取上清,然后用100ku超濾離心管(Millipore)濃縮至15mL,色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。濟南外泌體提取試劑哪家好
外泌體提?。菏褂每贵w包被珠子的分離不適合從大量樣本中獲得外泌體。廈門外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:純化和富集的完整血漿/血清,尿液和細胞培養(yǎng)基中外泌體的可用于功能研究;樣本輸入量多樣;無需耗時的超速離心,過濾或特殊注射器;無需沉淀試劑,也無需過夜培養(yǎng);無需蛋白酶處理;適用于多種物種;外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白;可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評估近似外泌體大小范圍和濃度。外泌體(exosomes)是一種能被機體內(nèi)大多數(shù)細胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡。它普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號分子,形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關。廈門外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
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