一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法:隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展,各種醫(yī)用耗材的更新?lián)Q代也是日新月異。止血材料是常見的醫(yī)療器械產(chǎn)品。但是現(xiàn)今市面上的止血材料不光存在著容易引起傷口傳染的缺點(diǎn);同時(shí)還存在著容易與傷口粘附不易去除,導(dǎo)致傷口潰爛,或者因?yàn)檎掣綄?dǎo)致傳染;再次就是止血材料多是通過吸收血液及添加凝血酶等外在因素止血,很少有止血材料是使用能夠自身具有止血性質(zhì)的材料來生產(chǎn)的?,F(xiàn)今市面上的可吸收止血材料有氧化纖維素、α-氰基丙烯酸酯類組織膠、醫(yī)用止血明膠等,但是都有各自的缺點(diǎn)。如氧化纖維素可引起組織周圍PH值升高;α-氰基丙烯酸酯類組織膠降解過程中釋放出氰和甲醛等有毒物質(zhì);醫(yī)用止血明膠黏附性較差,易脫落,因其吸收血液后膨脹可能壓迫傷口周圍組織等。可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。長沙正規(guī)鼠尾膠原供應(yīng)商
對(duì)于生物科研汪們來說,大白鼠、小白鼠們簡直渾身是寶,從毛發(fā)、皮膚,到心肝脾肺,甚至各種排泄物,都是我們重要的研究對(duì)象。尾巴,自然也是。所以耗子尾汁不僅存在,甚至是我們生物實(shí)驗(yàn)中必不可少的實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)對(duì)象。有不少人靠「耗子尾汁」發(fā)了CNS和頂刊。沒有「耗子尾汁」,很多課題可能都沒辦法開展。在以小鼠為模式生物進(jìn)行科學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)室中,日常和基本的一個(gè)實(shí)驗(yàn)就是提取它們的遺傳物質(zhì)—DNA(脫氧核糖核酸)進(jìn)行基因型鑒定,檢測這些小動(dòng)物的基因組中是否含有特定的DNA。可以理解為給小動(dòng)物做核酸檢測。太原正規(guī)鼠尾膠原產(chǎn)品介紹鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,并且制作簡便。
鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純。從提取原料到樣品生成過程中,進(jìn)行多次真空冷凍干燥,并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3%以下的膠原蛋白微粉;較后由滅菌、無菌包裝,成品膠原蛋白粉末的純度在98%以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了產(chǎn)率和生物相容性,降低了成本,適用于生物醫(yī)用材料,所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)。
鼠尾膠原凝膠體在皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)中的應(yīng)用:在國外的藥理,毒理和皮膚病學(xué)的研究領(lǐng)域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細(xì)胞的材料和方法r1]實(shí)驗(yàn)材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細(xì)胞生長因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細(xì)胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細(xì)胞的分離和細(xì)胞懸液的制備:2~3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細(xì)胞懸液,加入細(xì)胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細(xì)胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見文獻(xiàn)c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣。鼠尾膠原醋酸溶解:不建議用過濾的方法無菌化。
鼠尾膠原醋酸溶解:1.將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜。鼠尾膠原醋酸溶解:氯仿的量約為膠原溶液的10%。濟(jì)南鼠尾膠原報(bào)價(jià)
成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,并且制作簡便,成本低廉。長沙正規(guī)鼠尾膠原供應(yīng)商
酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對(duì)分子質(zhì)量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,其腱性組織被水解成膠凍狀溶液,從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上,可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(,其生物力學(xué)強(qiáng)度極差,一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進(jìn)行SDS-PAGE,結(jié)果顯示:Ⅰ型膠原蛋白原液在相對(duì)分子質(zhì)量130000附近有明顯條帶,另一條帶的相對(duì)分子質(zhì)量大于170000(圖2)。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中,將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6d后,分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進(jìn)行TEM和電子衍射觀察。長沙正規(guī)鼠尾膠原供應(yīng)商
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B.含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...