鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入100ul10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。鼠尾膠原,是一種天然培養(yǎng)基,它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用。武漢正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)
鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3)在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4)在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積,混勻,冰上備用。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí)。6)使用時(shí),無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。南昌鼠尾膠原平均價(jià)格開蓋在超凈臺(tái)上過夜晾干,也可以在室溫放置1小時(shí)后。
具體實(shí)施方式實(shí)施例1止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個(gè)材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?.2%0.2%。余量為水。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)小板,-40°C預(yù)凍池,再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍4h,再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥10h,即可以得到復(fù)合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌,干燥保存。凍干的材料可直接用于各種傷口的止血。實(shí)施例2止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個(gè)材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?%2%1%,余量為水。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)板,-20°C預(yù)凍,再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍8h,再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥30h,即可以得到復(fù)合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌,干燥保存。
鼠尾Ⅰ型膠原:材料與方法:1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司);多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開,去掉皮毛,并剪成小段,抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中,用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,將肌鍵置于平皿中剪碎,按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,將肌鍵分散于醋酸溶液中,4℃放置一周,然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下,肌腱水解成膠凍狀凝膠,置于冰箱4℃保存。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。
利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。方法通過醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白,并重構(gòu)成膠原纖維。然后,將重構(gòu)后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2~6d,通過透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化。結(jié)果酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構(gòu)成膠原纖維,并且具有特征性的D-Band結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示:礦化2d后,羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維,膠原纖維部分礦化;礦化6d后,膠原纖維內(nèi)部完全礦化,形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料。結(jié)論利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構(gòu)成膠原纖維,經(jīng)礦化可形成與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)一致的仿生骨材料。膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了產(chǎn)率和生物相容性,降低了成本,適用于生物醫(yī)用材料。濟(jì)南正規(guī)鼠尾膠原服務(wù)電話
鼠尾膠原醋酸溶解:氯仿的量約為膠原溶液的10%。武漢正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)
膠原蛋白的功效:1.膠原蛋白可以作為一種補(bǔ)鈣食品,膠原蛋白的特征氨基酸羥基脯氨酸是血漿中運(yùn)輸鈣到骨細(xì)胞的運(yùn)載工具,骨細(xì)胞中的骨膠原是羥基磷灰石的粘合劑,它與羥基磷灰石共同構(gòu)成了骨骼的主體。因此,只要攝入足夠的膠原蛋白,就能保證正常機(jī)體鈣質(zhì)的攝入量,膠原蛋白可制成補(bǔ)鈣的保健食品。2.膠原蛋白在人體運(yùn)動(dòng)鍛煉的過程中,可以促使身體消耗大量脂肪達(dá)到的效果。但需要注意的是膠原蛋白本身是沒有作用的,它只能在運(yùn)動(dòng)呢鍛煉是增加脂肪的消耗量。3.膠原蛋白是身體免疫作用中負(fù)責(zé)重要功能的阿米巴細(xì)胞清掃異物的感知器,因此對(duì)預(yù)防疾病很有幫助。可提高免疫機(jī)能、克制細(xì)胞、活化細(xì)胞機(jī)能、活化筋骨、治好關(guān)節(jié)炎及酸痛。武漢正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B.含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...