昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:將50~300mg昆蟲組織放入10~15mL塑料離心管中,加入1mL溶液A,然后用勻漿器勻漿5~20秒。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫,但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎昆蟲組織,硯磨完后加入1mL溶液A。注意:溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀,使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備氯仿,在振蕩器上振蕩30秒混勻,此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來。室溫12000rmp離心3~5分鐘,兩相間將有約5-10毫米厚的細(xì)胞破碎物。將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中,下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì),避免觸及或吸取。較好留下100μL上清液不取。加入等體積的溶液C,充分顛倒混勻。血漿/血清RNA提取試劑盒:普通植物總RNA提取試劑盒:采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱。上海RNA提取試劑供應(yīng)商
經(jīng)典Trizol法并不能獲得總RNA:這個(gè)事實(shí)可能會(huì)刷不少新手甚至老手的三觀,但確有實(shí)驗(yàn)支持:經(jīng)典Trizol法會(huì)選擇性丟失低GC比的miRNA。這一點(diǎn),源自一則作者自撤稿的故事。V.NarryKim是韓國鼎鼎大名的美女科學(xué)家,專做RNA相關(guān)的研究,包括miRNA。幾年前她們組發(fā)現(xiàn)一個(gè)奇怪的“現(xiàn)象”,即貼壁細(xì)胞在消化之后,會(huì)有一些miRNA的豐度突然降低,看起來好像是被快速“降解”掉了,并據(jù)此寫了一篇文章發(fā)到MolecularCell上。但很快她們就發(fā)現(xiàn),這個(gè)“現(xiàn)象”難以重復(fù):如果用Trizol做實(shí)驗(yàn),就一定是陽性結(jié)果,而用試劑盒提RNA,就重復(fù)不出來。難道是號(hào)稱能提總RNA的Trizol方案出了問題?確實(shí)如此。經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn),經(jīng)典的Trizol方案會(huì)使得低GC比的miRNA丟失。合肥正規(guī)RNA提取試劑單價(jià)優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。
RNA提取試劑的選擇:對于富含多糖多酚的植物類組織提取是個(gè)難點(diǎn),Takara精心研發(fā)的柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以輕松解決這個(gè)問題。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地從各種簡單的植物組織材料(葉片、莖、幼苗等)、富含多糖多酚的植物組織材料(果實(shí)、種子等)、菌類提取高純度的TotalRNA,適用范圍普遍。按照標(biāo)準(zhǔn)流程,本試劑盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,也可以按照可選步驟提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。試劑盒中包含了RNA提取所需的全部試劑,無需額外購買其它試劑~
安德魯·法爾稱:“克雷格和我的工作是研究為什么一些基因會(huì)停止運(yùn)行,我們試圖去控制它們,我們發(fā)現(xiàn)了一些東西可以有效地中止它們。這些基因并不能告訴你它們能做什么,所以如果你能中止它們,你就可以開始了解它們能做什么。不過,較初發(fā)現(xiàn)RNA現(xiàn)象的是一位華人學(xué)者,非常可惜,他沒有進(jìn)一步弄清這是為什么?!倍税l(fā)現(xiàn)的是一個(gè)有關(guān)控制基因信息流程的關(guān)鍵機(jī)制。人們的基因組通過從細(xì)胞核里的DNA向蛋白質(zhì)的合成機(jī)制發(fā)出生產(chǎn)蛋白質(zhì)的指令,這些指令通過mRNA傳送。他們發(fā)現(xiàn)一種可以用特定基因降解mRNA的方式,在這種RNA干擾現(xiàn)象中,雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達(dá)。這項(xiàng)技術(shù)被用于全球的實(shí)驗(yàn)室來確定在各種病癥中哪種基因起到了重要作用。RNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無數(shù)人頭疼的問題。
RNA提取試劑注意事項(xiàng):1、必須戴一次性手套操作,且盡量不要對著RNA樣品說話,以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。2、TRIReagent含有毒物質(zhì)苯酚,避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛,請戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏。如皮膚接觸TRIReagent,請立即用大量去垢劑和水沖洗,如仍有不適,請聽取醫(yī)生意見。3、TRIReagent抽提總RNA的同時(shí),理論上也可抽提蛋白和DNA,但未經(jīng)測試。4、為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。是基于異硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細(xì)胞和組織中提取總RNA的試劑,在樣品裂解或勻漿過程中取出水相,用異丙醇可沉淀回收RNA;中間層用乙醇沉淀可回收DNA;有機(jī)相用異丙醇沉淀可回收蛋白。好的試劑盒價(jià)格比較貴,在實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要來定奪試劑盒的使用。唐山正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格
拭子RNA提取試劑的選擇?洗脫液洗脫能力好,核酸的提取得率就高。上海RNA提取試劑供應(yīng)商
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對于動(dòng)物組織、簡單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無需苯酚氯仿抽提等步驟,簡單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成上海RNA提取試劑供應(yīng)商
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在7...