鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡。B．含細胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意事項：在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進體外培養(yǎng)細胞（特別是上皮細胞）貼壁的作用。長沙鼠尾膠原供應商

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每3個氨基酸殘基形成一圈螺旋。3條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區(qū)，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。溫州天津鼠尾膠原鼠尾膠原醋酸溶解：在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。

鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司)；多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈，用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開，去掉皮毛，并剪成小段，抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中，用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液，將肌鍵置于平皿中剪碎，按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃，將肌鍵分散于醋酸溶液中，4℃放置一周，然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下，肌腱水解成膠凍狀凝膠，置于冰箱4℃保存。

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL，用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中，倒入0.5mL自組裝液，室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中，將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL；滴加1mol/L的氯化氫，調(diào)節(jié)酸堿度至7.4，然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉)，約16滴/min。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。成纖維細胞膠原凝膠復合物有著良好的生物學特性。

鼠尾膠原凝膠體在皮膚細胞原代培養(yǎng)中的應用：在國外的藥理,毒理和皮膚病學的研究領(lǐng)域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細胞的材料和方法r1]實驗材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細胞生長因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細胞的分離和細胞懸液的制備:2～3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細胞懸液,加入細胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見文獻c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。為了能夠從小鼠身上提取足夠的DNA，要從它們身上取下足量的細胞用于實驗。蕪湖鼠尾膠原廠家

建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。長沙鼠尾膠原供應商

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當?shù)墓切迯筒牧鲜侵魏霉侨睋p的中心環(huán)節(jié)。目前，臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植。其中，人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機礦物材料[1-2]，由于不含自體骨組織中的有機大分子Ⅰ型膠原蛋白，其臨床療效遠遠低于自體骨組織。但是，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織，數(shù)量有限，難以滿足臨床需要。因此，研發(fā)與人類自體骨組織化學成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學者孜孜以求的目標。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物，在分子結(jié)構(gòu)上，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙，沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長[3]。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu)，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化。長沙鼠尾膠原供應商