原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)：a.細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性。b.細(xì)胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L。c.培養(yǎng)基可用Eagle(MEMCorning10-010-CVR)或DMEM(Corning10-013-CVR)培養(yǎng)。d.胎牛血清濃度為10%-80%。e.應(yīng)在37℃5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。f.在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂浮。g.待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液。h.用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。永生化細(xì)胞系通常具有更快的倍增時間并可持續(xù)地分裂。徐州正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家推薦

使用RFect系列小核酸轉(zhuǎn)染試劑做siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染測實驗注意事項：1.細(xì)胞接種：一般做轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在接種/鋪板（細(xì)胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml），使做轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度在30-50%；如果細(xì)胞是原代細(xì)胞，接種密度可以密一些，細(xì)胞計數(shù)在2*10^6cell/ml；懸浮細(xì)胞可以在轉(zhuǎn)染當(dāng)天接種/鋪板（細(xì)胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml），待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后做轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度30-40%。2.為了能在使用時有較好的轉(zhuǎn)染效果，靠前次使用建議您用24孔板做，每孔2ul轉(zhuǎn)染試劑即可。將較佳轉(zhuǎn)染條件（siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的用量、比例）放大到對應(yīng)的孔板即可南京正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒生產(chǎn)廠家將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。

原代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項：1.收到細(xì)胞時，要鏡下觀察是否有污染情況；收到細(xì)胞的前幾天，要做好各種倍數(shù)的鏡下拍照記錄，以防細(xì)胞出現(xiàn)問題后，可以跟公司很好地溝通。2.收到細(xì)胞后，不要馬上處理。應(yīng)置于培養(yǎng)箱中靜置4h以上再操作。如果不著急，可靜置過夜。3.細(xì)胞的靠前次傳代，一定要密度高一些傳代，原代細(xì)胞傳代密度低，很難長起來。建議1:2-1:3傳代。4.原代細(xì)胞傳代時（內(nèi)皮細(xì)胞，貼壁為例），0.25%+0.53nM的胰酶消化，1ml消化液37度培養(yǎng)箱內(nèi)消化30sec，再加入5ml培養(yǎng)基（正常消化貼壁細(xì)胞，我們使用胰酶和培養(yǎng)基的量是1:1，但是原代細(xì)胞必須用大量培養(yǎng)基中和胰酶）。5.原代細(xì)胞不建議凍存，因為凍存很容易復(fù)活不成功。如果要凍存的話，建議在P2或P3代凍存，凍存液中的血清越多越好，建議比例9（血清）:1（DMSO）。6.原代細(xì)胞復(fù)蘇時，置于37-38度水浴融化細(xì)胞，并加入10ml培養(yǎng)液（正常貼壁細(xì)胞復(fù)蘇時，也可以使用這種比例，復(fù)蘇成活率會較大提高），離心重懸鋪板。

原代細(xì)胞的獲取：1.培養(yǎng)時間無論是酶消化法還是組織塊法，取樣后培養(yǎng)時間較少需要一周以上的時間，期間可換液或者傳代。2.換液時間無論酶消化法還是組織塊法，在培養(yǎng)期間需要隨時關(guān)注細(xì)胞的生長狀況，需觀察其是否貼壁，是否污染，組織塊法要觀察是否有細(xì)胞遷移出來。正常情況下48~72h可換液一次。3.細(xì)胞狀態(tài)判斷正常貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)幾天后，會逐漸貼滿整個瓶底或者皿底，有的呈纖維狀，有的呈多邊形。下圖均為比較健康的原代細(xì)胞圖（左：小鼠成纖維細(xì)胞；右：雞胚成纖維細(xì)胞；下：人成纖維細(xì)胞）。打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋。

注意事項：所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品，操作過程要小心，帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純，需電泳檢測。使用時一定要根據(jù)自己的實驗需要購買提取試劑盒，如果不是試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質(zhì)量以及完整性，會影響RT-PCR、Northernblot、Dotblot、RealtimeRTPCR、芯片分析、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析、分子克隆等后續(xù)實驗的結(jié)果。當(dāng)前提取效果好的是RNA提取試劑盒，但其售價較高，單次實驗費用花費太大，對精度要求不高的實驗沒有必要購買，當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒，但是均存在價格高、訂貨周期長的問題（如果碰上國內(nèi)無貨的時候，要從國外發(fā)貨，會等很長一段時間）。普通的提取實驗用國產(chǎn)的試劑盒就足以，價格不高，基本上各地均有現(xiàn)貨，如天根（國內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯，性價比還可以它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細(xì)胞的生長。蕪湖珠海原代細(xì)胞分離試劑盒

使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。徐州正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家推薦

關(guān)于細(xì)胞株和細(xì)胞系以及原代細(xì)胞的區(qū)別：原代培養(yǎng)物經(jīng)開始傳代成功即稱為細(xì)胞系，因此細(xì)胞系可泛指一般可能傳代的細(xì)胞。其中能夠連續(xù)傳代的細(xì)胞叫做連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系，不能連續(xù)培養(yǎng)的稱為有限細(xì)胞系；大多數(shù)二倍體細(xì)胞為有限細(xì)胞系。通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細(xì)胞株，也就是說，細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。細(xì)胞系（cellline）指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)開始傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。（由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系（FiniteCellLine）、無限細(xì)胞系（InfiniteCellLine）），因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞（特定環(huán)境下口語和書面語都使用），廣義是指可傳代的細(xì)胞。。徐州正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家推薦

蘇州君欣生物科技有限公司是一家有著雄厚實力背景、信譽(yù)可靠、勵精圖治、展望未來、有夢想有目標(biāo)，有組織有體系的公司，堅持于帶領(lǐng)員工在未來的道路上大放光明，攜手共畫藍(lán)圖，在江蘇省等地區(qū)的精細(xì)化學(xué)品行業(yè)中積累了大批忠誠的客戶粉絲源，也收獲了良好的用戶口碑，為公司的發(fā)展奠定的良好的行業(yè)基礎(chǔ)，也希望未來公司能成為*****，努力為行業(yè)領(lǐng)域的發(fā)展奉獻(xiàn)出自己的一份力量，我們相信精益求精的工作態(tài)度和不斷的完善創(chuàng)新理念以及自強(qiáng)不息，斗志昂揚(yáng)的的企業(yè)精神將**蘇州君欣生物科技供應(yīng)和您一起攜手步入輝煌，共創(chuàng)佳績，一直以來，公司貫徹執(zhí)行科學(xué)管理、創(chuàng)新發(fā)展、誠實守信的方針，員工精誠努力，協(xié)同奮取，以品質(zhì)、服務(wù)來贏得市場，我們一直在路上！