外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開(kāi)發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化處理,適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、尿液及其他體液(腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過(guò)濾裝置,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項(xiàng):1.對(duì)于待測(cè)樣品粘度過(guò)大時(shí),可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理。2.當(dāng)血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,收獲的外泌體顆粒無(wú)法通過(guò)EPF柱純化時(shí),可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過(guò)EPF柱離心。3.針對(duì)外泌體標(biāo)志蛋白(CD63,CD9,CD81等)進(jìn)行Westernblot檢測(cè),可以鑒定所提的外泌體。通過(guò)超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量。外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液、唾液、腹水、胸腹水等)和細(xì)胞液中快速提取的。重慶外泌體提取試劑服務(wù)電話(huà)
由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),另一方面也可以作為治病手段,未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問(wèn)題,獲得高純度的外泌體對(duì)后續(xù)的研究至關(guān)重要。據(jù)了解,目前人們多采用超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法實(shí)現(xiàn)外泌體的提取分離。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過(guò)程,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。南京正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜無(wú)法實(shí)現(xiàn)臨床的常規(guī)化應(yīng)用。
1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā)。如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵
外泌體的提取主要包括以下幾種方式:一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心,這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時(shí),量少。四是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性,不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。五是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā)。對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā)。上海正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商
外泌體提?。嚎梢詫⒉煌南疵撊芤簯?yīng)用于該方法。重慶外泌體提取試劑服務(wù)電話(huà)
外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測(cè)到Tau和Aβ蛋白。類(lèi)似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn)。PD病人腦脊液外泌體可檢測(cè)到α-synuclein,ALS病人外泌體中也可以檢測(cè)到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機(jī)制表明,通過(guò)分析外泌體的組分,可以幫助識(shí)別其來(lái)源的細(xì)胞類(lèi)型。這一特性已被應(yīng)用于開(kāi)發(fā)心血管疾病,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測(cè)試。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層。重慶外泌體提取試劑服務(wù)電話(huà)
外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷:近年來(lái),高通量質(zhì)譜分析被普遍地應(yīng)用于篩選NSCLC外泌體蛋白的研究,這為我們揭示了更多具有生物標(biāo)志物價(jià)值的分子。Birgitte等采用微陣列芯片技術(shù)研究了431例肺病患者和150例對(duì)照者血漿外泌體中的蛋白表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)CD151、CD171和TSPAN8這三種蛋白表達(dá)不光能區(qū)分一些病癥與正常組織,同時(shí)也能區(qū)分各種肺病的組織亞型。此外,聯(lián)合應(yīng)用這三種蛋白診斷NSCLC的AUC達(dá)到0.74。Clark等采用納升液聯(lián)用技術(shù)(nano-ESI-LC-MS/MS)分析了來(lái)自正常支氣管上皮細(xì)胞系和兩個(gè)攜帶NSCLC細(xì)胞系的外泌體的蛋白表達(dá)譜,從中篩選出如細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘...