膠原蛋白的提取方法：1.堿法提?。簤A法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以，若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，此法不可取。2.鹽法提取：鹽法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下，當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí)，膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對(duì)提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理，可以沉淀出不同類(lèi)型的膠原蛋白。鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便。徐州鼠尾膠原廠家供應(yīng)

利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類(lèi)自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。方法通過(guò)醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白，并重構(gòu)成膠原纖維。然后，將重構(gòu)后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2～6d，通過(guò)透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化。結(jié)果酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構(gòu)成膠原纖維，并且具有特征性的D-Band結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示：礦化2d后，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維，膠原纖維部分礦化；礦化6d后，膠原纖維內(nèi)部完全礦化，形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料。結(jié)論利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構(gòu)成膠原纖維，經(jīng)礦化可形成與人類(lèi)自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)一致的仿生骨材料。金華石家莊鼠尾膠原細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例。

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋。3條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋。這樣的螺旋稱(chēng)為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區(qū)，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。

詳細(xì)步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；2.將尾巴剪開(kāi)、去掉皮毛，并剪成小段（3cm左右），抽出銀色的尾鍵；3.把剪碎的尾鍵置于150ml，0.1％消過(guò)毒的醋酸中，4℃放置，并不時(shí)振蕩；4.48h后取上清，4000轉(zhuǎn)離心30min后，取上清；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存。有時(shí)可繼續(xù)向4。中沉淀中加入10－20ml醋酸，重復(fù)以上步驟，以制備更多的鼠尾膠。在使用時(shí)，先將冰存的膠原液在室溫下解凍，再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿：1）用吸管吸取膠原液，在無(wú)菌的培養(yǎng)器皿的生長(zhǎng)面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液。2）若包被的是培養(yǎng)瓶，可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻。讓氨氣充入瓶?jī)?nèi)后，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞。若為培養(yǎng)皿或板的話(huà)，可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi)，將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi)，蓋緊飯盒蓋，四周用封口膠封死。前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁，易于封接和長(zhǎng)時(shí)間（約8h)的觀察和記錄。

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。目前，臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植。其中，人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無(wú)機(jī)礦物材料[1-2]，由于不含自體骨組織中的有機(jī)大分子Ⅰ型膠原蛋白，其臨床療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于自體骨組織。但是，自體骨移植和同種異體骨移植均來(lái)源于人類(lèi)自身骨組織，數(shù)量有限，難以滿(mǎn)足臨床需要。因此，研發(fā)與人類(lèi)自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo)。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物，在分子結(jié)構(gòu)上，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙，沿著膠原纖維的長(zhǎng)軸縱向礦化生長(zhǎng)。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu)，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化，通過(guò)透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉?？捎糜谥苽淙S膠原凝膠，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng)。金華石家莊鼠尾膠原

包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間。徐州鼠尾膠原廠家供應(yīng)

鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法。各個(gè)材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水，采用冷凍干燥工藝制備。本發(fā)明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備，較傳統(tǒng)的止血材料不可吸收、容易引起機(jī)體過(guò)敏、止血效果差等缺點(diǎn)，本發(fā)明所制備的止血材料具有人體內(nèi)可吸收，生物相容性好；止血效果快，具有很強(qiáng)的親水性；同時(shí)可啟動(dòng)血小板的凝聚，一旦血小板凝聚，就可形成血栓，進(jìn)而促使血漿結(jié)塊阻止血流。同時(shí)，膠原表面的特定區(qū)域可以與細(xì)胞表面存在的類(lèi)似纖連蛋白的糖蛋白結(jié)合，可以起到防止腸粘連的功效。徐州鼠尾膠原廠家供應(yīng)