植物RNA提取過程:植物組織成分相對于動物組織來說復(fù)雜多樣,因此其RNA的分離和純化的難度也隨之加大,如果要完美的數(shù)據(jù)結(jié)果,那么提取純度高、完整性好的RNA就成了關(guān)鍵所在。植物RNA的提取一般會經(jīng)歷以下幾個過程:1.破碎細(xì)胞壁。2.裂解細(xì)胞膜。3.雜質(zhì)去除,包括:DNA、蛋白質(zhì)、多糖、多酚、次生代謝產(chǎn)物等。4.純化和濃縮RNA。而在RNA提取過程中,純化除雜的過程是影響RNA純度的關(guān)鍵所在。在完整的細(xì)胞內(nèi),多糖多酚類化合物,次級代謝產(chǎn)物,蛋白質(zhì)如RNase等與核酸是分離的,一旦細(xì)胞破碎,這些物質(zhì)就不可避免的會與RNA發(fā)生相互作用??俁NA提取試劑:適用范圍普遍,可以從動物組織。徐州RNA提取試劑哪里買
RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實驗方案會推薦,在異丙醇沉淀后,用乙醇沉淀兩次。實際上,任何提取實驗,都會在純度和得率這一對矛盾中取舍。醇沉淀會將脂溶性雜質(zhì)去掉,但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會連同RNA一起被沉淀下來。因此,多整幾次,并不會讓RNA的純度翻倍,反而還會有降低得率的風(fēng)險。一般情況下,異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,倘若預(yù)計RNA濃度很低,那就只能放棄純度,在低溫沉淀數(shù)小時,以換來較高的得率。圍繞DEPC的玄學(xué)。許多實驗方案會推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水,以滅活RNase。這一點是要肯定的。不過,在使用DEPC的過程中,又充斥著一些玄學(xué)。高壓滅菌后的DEPC水,會有一股“香甜”的味道。許多人會以為那是殘留的DEPC而不敢用。實際上,這只是DEPC分解成CO2和乙醇后,產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類副產(chǎn)物。徐州RNA提取試劑哪里買植物RNA提取試劑:可從植物組織中快速提取總RNA,可同時處理大量不同樣品。
昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。加0.7mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。加0.3mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。此步可以省略。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50~100μLRNA洗脫液,室溫放置1~2分鐘。12000rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
RNA提?。侯A(yù)備工作(1)塑料制品:盡量使用一次性無菌塑料制品。已標(biāo)明RNase-free的塑料制品,如沒有開封使用過,通常不必再處理。處理的步驟如下:O在玻璃燒杯中注入去離子水,加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二乙基焦碳酸酯為活性很強(qiáng)的劇毒物,須在通風(fēng)櫥中小心使用)O將待處理的塑料制品放入一個可以高溫滅菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通風(fēng)柜中37℃或室溫下處理過夜。O將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中,將裝有DEPC-H2O處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口,高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。O滅菌塑料制品烘烤干燥,置潔凈處備用。(2)玻璃和金屬物品250℃烘烤3小時以上。血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對血清、血漿樣本中miRNA提取而開發(fā)的。
RNA試劑盒:用于各種植物、動物、微生物的RNA提取,在每個試劑盒里都有一份說明使用說明書。實驗者只需要按照說明書上的步驟操作即可。使用時無需配制其它試劑,非常方便,適合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、純度高,可用于分子生物學(xué)后實驗。但較好的試劑盒價格比較貴,在實驗室可以根據(jù)自己的實驗需要來定奪試劑盒的使用。注意事項所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品,操作過程要小心,帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間,但這并不表示RNA不純,需電泳檢測。RNA提取試劑注意事項:TRIReagent含有毒物質(zhì)苯酚,避免接觸皮膚或吸入。徐州RNA提取試劑哪里買
植物RNA提取試劑:操作簡單,提取迅速,溶液毒性小,實驗安全。徐州RNA提取試劑哪里買
細(xì)胞RNA提取的方法:異丙醇主要用于沉淀RNA。取出EP管后可以見到側(cè)壁沉淀,輕輕吸棄上清。向EP管中加入75%酒精洗滌沉淀,幫助分離剩余的有機(jī)試劑(剩余有機(jī)試劑過多會影響OD值和PCR反應(yīng)),輕彈沉淀,使其浮在酒精,靜置1-2min,讓酒精充分接觸沉淀,充分溶解有機(jī)試劑,然后4度離心5min。輕輕吸棄上清。將EP管再次放于離心機(jī)中瞬時離心,棄掉管壁殘余液體。然后將EP管置于超凈臺中干燥5-10min.。注意RNA樣品不要過于干燥,否則很難溶解。加入50ulDEPC處理水,震蕩充分溶解沉淀。測量RNA濃度。將RNA保存于-80度。徐州RNA提取試劑哪里買
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...