細胞轉(zhuǎn)染實驗注意事項：1.如為貼壁生長細胞，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日，必須應(yīng)用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，轉(zhuǎn)染當(dāng)日的細胞密度以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜，較好在轉(zhuǎn)染前4h換一次新鮮培養(yǎng)液。2.用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA必須無蛋白質(zhì)，無RNA和其他化學(xué)物質(zhì)的污染，OD260/280比值應(yīng)在1.8以上。3.培養(yǎng)基中的血清在開始準備DNA和陽離子脂質(zhì)體試劑稀釋液時要使用無血清的培養(yǎng)基，因為血清會影響復(fù)合物的形成。其實，只要在DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時不含血清，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。轉(zhuǎn)染試劑與細胞不匹配細胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細胞。長沙細胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家

如何高效率實現(xiàn)細胞轉(zhuǎn)染：DNA轉(zhuǎn)染導(dǎo)入細胞胞漿內(nèi)的DNA不能穿過細胞核的核膜（"核屏障"）。在細胞有絲分裂過程中核膜溶解，DNA進入細胞核才有可能。為此，細胞處于分裂期對DNA轉(zhuǎn)染是至關(guān)重要的，并且處于分裂期的細胞比例必須盡可能大才能實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染。DNA轉(zhuǎn)染機制示意圖如下所示：轉(zhuǎn)染RNA(siRNA/miRNA/mRNA)對于RNA轉(zhuǎn)染是沒有"核屏障"的，因為RNA不需要進入細胞核發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，因此細胞分裂對它沒有影響。轉(zhuǎn)染試劑的選擇理想的轉(zhuǎn)染試劑選擇可以使您的實驗如虎添翼！真核細胞的先天免疫系統(tǒng)，使它們能夠檢測外來物質(zhì)如脂多糖、細菌或細菌核酸和蛋白質(zhì)，并克制潛在病原體的入侵。此外，細胞通過信使分子向臨近細胞傳遞發(fā)現(xiàn)有害物質(zhì)的信號。因此，這些臨近細胞甚至無需接觸病原體即可采取防御方式。這種細胞先天免疫系統(tǒng)也是轉(zhuǎn)染成功的一個障礙。蘇州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA。

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：細胞狀態(tài)這點非常重要，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態(tài)再做。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復(fù)蘇后的3代左右時細胞狀態(tài)較好，不要用傳了很多代的細胞去做，細胞的形態(tài)都會發(fā)生變化。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化。如果隨時間發(fā)現(xiàn)這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性。因此，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復(fù)較佳結(jié)果?；蛘?，幾種來源于經(jīng)篩選，轉(zhuǎn)染效率較高細胞亞系的細胞系現(xiàn)在有售

細胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預(yù)實驗，比如：HeLa，293，CHO，COS7，MCF－7，HepG2等細胞，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的，有些細胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響。轉(zhuǎn)染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基，其一因為普通轉(zhuǎn)染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉(zhuǎn)染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉(zhuǎn)染后可適時加入。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細胞的優(yōu)勢生長，過晚會引起較多細胞死亡。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清。重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，較好在轉(zhuǎn)染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液。

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.不注意細節(jié)在轉(zhuǎn)染之前更換一次37℃預(yù)溫的培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)染效率。脂質(zhì)體和DNA/RNA混合物應(yīng)當(dāng)一滴一滴地滴下來，從培養(yǎng)皿一邊滴到另一邊，邊滴邊輕搖培養(yǎng)皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度。這些都是一些細枝末節(jié)，但是，如果不注意的話，也會造成轉(zhuǎn)染效率低下。2.細胞狀態(tài)不好細胞狀態(tài)不好，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低下。一般進行轉(zhuǎn)染的細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。如果是貼壁細胞的話，貼壁率應(yīng)該在70-80%；如果是懸浮細胞的話，應(yīng)該是6X105個/孔（24孔板），一般是轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在換液，轉(zhuǎn)染前用無血清培養(yǎng)基或PBS洗細胞一次。轉(zhuǎn)染的整個過程都不應(yīng)該有物品。能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)。金華正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑服務(wù)電話

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影響轉(zhuǎn)染試驗的因素：1.轉(zhuǎn)染試劑跟細胞系不匹配轉(zhuǎn)染試劑跟細胞系也是講究配合默契的，使用同一種試劑，不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同。但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉(zhuǎn)染實驗前應(yīng)根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇較適合實驗設(shè)計的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然，較適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉(zhuǎn)染試劑。因為有些細胞系是不穩(wěn)定的，可能隨著培養(yǎng)時間的改變，培養(yǎng)條件的不同，不同的選擇壓力，可能引起不同的克隆選擇。因此就算是同一個細胞系，在不同條件下轉(zhuǎn)染能力的差異可能會很大。長沙細胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家

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