外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,組分經(jīng)過優(yōu)化處理,適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、尿液及其他體液(腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項:1.對于待測樣品粘度過大時,可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理。2.當(dāng)血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過EPF柱離心。3.針對外泌體標(biāo)志蛋白(CD63,CD9,CD81等)進(jìn)行Westernblot檢測,可以鑒定所提的外泌體。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量外泌體的提取方法:超濾離心。成都正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹
外泌體的提取、分離方法:尺寸排阻色譜法和超濾法;尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù)。該方法的主要優(yōu)點(diǎn)是不需要很大的離心力,從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,結(jié)果顯示,后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法,超濾一般被認(rèn)為是外泌體分離過程中的一個準(zhǔn)備過程,通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì)。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體,和超高速離心相比,超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時間內(nèi)分離出外泌體。但是,超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產(chǎn)量,并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂。金華外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及。
外泌體(exosomes)是活細(xì)胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個外泌體,大約平均每個細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類,在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細(xì)胞、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu),天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,Exosome可通過細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細(xì)胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,它可以通過外泌體從一個地方轉(zhuǎn)運(yùn)到另外一個地方行使基因沉默功能。通過檢測外泌體中miRNA表達(dá)變化,可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。
外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,可通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體,內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間,其中包含RNA、蛋白質(zhì)、microRNA、DN段等多種物質(zhì),存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,雖然較初被認(rèn)為可能是細(xì)胞的“垃圾”,所以才被排出來,但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞。如今,研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、一些病癥細(xì)胞發(fā)生的發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用。近年來,隨著人們對外泌體的研究和認(rèn)識加深。北京外泌體提取試劑推薦廠家
由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì)。成都正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹
用于外泌體提取的體液收集注意事項:1、選擇血清還是血漿?推薦大多數(shù)研究選擇血漿。血液凝固過程中血小板會產(chǎn)生大量外泌體,含量占血清中外泌體的50%以上,選擇血漿可避免不必要的影響。2、注意抗凝劑的選擇。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān),這可能是因?yàn)楦嗡嘏c引物和/或酶有競爭作用。除了克制PCR,肝素可以與外泌體結(jié)合,阻止細(xì)胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達(dá)莫(CTAD),CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體。EDTA可能會干擾PCR反應(yīng)(盡管其程度小于肝素),但是還是優(yōu)于其他選擇。此外,有研究表明鈣螯合劑可在體外促進(jìn)外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量。使用肝素時這種影響就不會發(fā)生,因此建議在測量外泌體的精確數(shù)量時選用肝素。但是也有研究表明肝素可以導(dǎo)致體外條件下外泌體的減少??傊?,目前尚需要更多的研究論證抗凝劑是否及如何對外泌體的釋放,作用和下游反應(yīng)產(chǎn)生特異性影響。成都正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹
蘇州君欣生物科技,2019-12-16正式啟動,成立了原代細(xì)胞,無血清細(xì)胞凍存液,干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,動物疾病模型等幾大市場布局,應(yīng)對行業(yè)變化,順應(yīng)市場趨勢發(fā)展,在創(chuàng)新中尋求突破,進(jìn)而提升蘇州君欣生物的市場競爭力,把握市場機(jī)遇,推動精細(xì)化學(xué)品產(chǎn)業(yè)的進(jìn)步。蘇州君欣生物科技經(jīng)營業(yè)績遍布國內(nèi)諸多地區(qū)地區(qū),業(yè)務(wù)布局涵蓋原代細(xì)胞,無血清細(xì)胞凍存液,干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,動物疾病模型等板塊。我們在發(fā)展業(yè)務(wù)的同時,進(jìn)一步推動了品牌價值完善。隨著業(yè)務(wù)能力的增長,以及品牌價值的提升,也逐漸形成精細(xì)化學(xué)品綜合一體化能力。公司坐落于江蘇省張家港市塘橋鎮(zhèn)東城科技創(chuàng)業(yè)園C幢二樓,業(yè)務(wù)覆蓋于全國多個省市和地區(qū)。持續(xù)多年業(yè)務(wù)創(chuàng)收,進(jìn)一步為當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)、社會協(xié)調(diào)發(fā)展做出了貢獻(xiàn)。
外泌體可通過流式、WB(檢測指標(biāo)有CD9,CD63,CD81)、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測,普遍應(yīng)用于藥物載體、疾病診斷marker、精細(xì)醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小,樣本含量低,提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量、純度以及生物活性。外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移。與細(xì)菌傳染,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,并與心血管疾病,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系外泌體的提取方法:超速離心法(差速...