外泌體在肺病進程中的作用:在一些病癥微環(huán)境中,一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調節(jié)性T細胞,壓制機體的抗一些病癥免疫反應;肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細胞中結合并啟動TLR8,使TLR介導的NF-κB信號通路活化,從而導致一些病癥的生長和轉移。在肺病的侵襲和轉移過程中,細胞間通訊扮演著重要的角色。據有關報道稱,NSCLC分泌的外泌體內TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉移密切相關。此外,啟動的T細胞可以通過調控Fas信號通路增加基質金屬蛋白酶9(MMP9)的表達,進而促進肺病的轉移。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點。雖然大多數外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉移,但也有報道稱,外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉移與增殖。如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產生難以去除的聚合物。外泌體提取:高速離心以消除更大的囊泡。濟南正規(guī)外泌體提取試劑價格
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。、杭州正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。
外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,組分經過優(yōu)化處理,適用于細胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、尿液及其他體液(腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項:1.對于待測樣品粘度過大時,可將樣本用4℃預冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理。2.當血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,可用4℃預冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心。3.針對外泌體標志蛋白(CD63,CD9,CD81等)進行Westernblot檢測,可以鑒定所提的外泌體。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量。
外泌體因諾貝爾醫(yī)學獎而被眾人知曉,也因其作為生命信息傳遞者,在體液中普遍存在及易獲得性等特點被譽為液體活檢"新貴",成為疾病的精確診斷和治病研究的熱點,尤其是在一些病癥研究領域[。外泌體作為細胞間通信載體的作用現在已被普遍接受。外泌體包含胞質環(huán)境中富含的DNA,RNA,蛋白質和其它分析物,研究表明,外泌體中的運轉RNA和蛋白質與一些病癥的生長密切相關,有望作為診斷標志物。研究發(fā)現Vps4A是一個外泌體的重要調控因子,與肝病的發(fā)生有著密切的關系,Vps4A基因的表達下調肝病的發(fā)生及轉移相關。通過microRNA高通量測序發(fā)現Vps4A基因能導致外泌體分泌肝病相關的重要microRNA,與肝病的發(fā)生密切相關。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣。
外泌體的提取方法學規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等。關于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,費事費力,而且步驟多導致實驗中容易污染,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對于抽提細胞上清來說,更是極為不請便,試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,都具有操作極其不便的缺點,總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,造成濃縮效率低,濃縮管重復利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團,造成損失及較后的數據有誤差,對于后續(xù)實驗也有影響。用于外泌體提取的體液收集注意事項:抽血時間。北京外泌體提取試劑平均價格
外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:無需沉淀試劑,也無需過夜培養(yǎng)。濟南正規(guī)外泌體提取試劑價格
外泌體在肺病治病中的作用:有研究發(fā)現,使用外泌體運載紫杉醇(PTX)可顯著提高病細胞對PTX的吸收,將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細胞毒性,Exo-PTX能顯著壓制肺病的發(fā)展。Aqil等在進行裸鼠實驗時發(fā)現,加載至外泌體中的雷公藤紅素(Exo-CEL)比普通的CEL有更強的抗一些病癥功效,且在小鼠中未發(fā)現明顯全身性或系統(tǒng)性毒性,由此可以證明,外泌體制劑可以有效增強CEL功效并降低與劑量有關的毒性。到目前為止,外泌體在肺病治病方面的研究主要集中于免疫壓制,有效的外泌體藥物遞送平臺的搭建以及外泌體相關的潛在治病靶點的探索。已有的研究表明外泌體在肺病治病領域有著廣闊的前景,期待外泌體在肺病治病領域早日得到突破,造福更多的患者。濟南正規(guī)外泌體提取試劑價格
蘇州君欣生物科技有限公司成立于2019-12-16,位于江蘇省張家港市塘橋鎮(zhèn)東城科技創(chuàng)業(yè)園C幢二樓,公司自成立以來通過規(guī)范化運營和高質量服務,贏得了客戶及社會的一致認可和好評。公司主要經營原代細胞,無血清細胞凍存液,干細胞無血清培養(yǎng)基,動物疾病模型等,我們始終堅持以可靠的產品質量,良好的服務理念,優(yōu)惠的服務價格誠信和讓利于客戶,堅持用自己的服務去打動客戶。蘇州君欣生物集中了一批經驗豐富的技術及管理專業(yè)人才,能為客戶提供良好的售前、售中及售后服務,并能根據用戶需求,定制產品和配套整體解決方案。我們本著客戶滿意的原則為客戶提供原代細胞,無血清細胞凍存液,干細胞無血清培養(yǎng)基,動物疾病模型產品售前服務,為客戶提供周到的售后服務。價格低廉優(yōu)惠,服務周到,歡迎您的來電!
將濃縮液加至20mmol/LTris/30%蔗糖/45%蔗糖(pH7.4)的密度梯度液上行4℃超速離心100000×g(水平轉子SW-41)8h,吸取位于蔗糖之上的顏色明顯較深條帶的液體約5mL,以10倍PBS稀釋混勻后再次用100-ku超濾離心管(Millipore)濃縮至5mL,將濃縮液重新以10倍PBS稀釋后4℃超速離心100000×g(角轉子TYPE50.2)4h,收集離心管底部約1mL液體及極微量沉淀(來自2×107個細胞)以20mLPBS重懸即為胞外體,用0.22μm過濾膜除菌后凍存于-80℃?zhèn)溆?。(該步驟參考文獻“腫瘤細胞來源胞外體的分離鑒定與功能檢測”)優(yōu)點是:分離得到的外泌體...