鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用:原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構(gòu)建,對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài),流式細胞技術(shù)檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達。整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作,避免污染以影響細胞生長。南昌鼠尾膠原廠家
鼠尾膠原實驗應(yīng)用:探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細胞膜片鉗實驗中的促進毛細胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原,觀察全細胞膜片鉗實驗中,自制的鼠尾膠原對前庭毛細胞的貼壁黏附作用。結(jié)果無鼠尾膠原時,前庭毛細胞懸浮于外液,不宜封接;有鼠尾膠原時,前庭毛細胞貼附于培養(yǎng)皿底壁,易于封接和長時間(約8h)的觀察和記錄。鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用。結(jié)論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。廈門鼠尾膠原廠家批發(fā)價方法制作鼠尾膠原,觀察全細胞膜片鉗實驗中,自制的鼠尾膠原對前庭毛細胞的貼壁黏附作用。
膠原蛋白的提取方法:1.堿法提?。簤A法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%~1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解,因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以,若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu),此法不可取。2.鹽法提?。蝴}法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下,當鹽的濃度達到一定量時,膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進行鹽析處理,可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。
鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構(gòu)建,對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài),流式細胞技術(shù)檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達。結(jié)果與結(jié)論:兩組培養(yǎng)皿中,隨著過氧化氫濃度的增高,均可見細胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細胞存活率及細胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,細胞凋亡率及細胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性。在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹。
一種海貍鼠尾膠原手術(shù)縫合線制備方法,其特征在于,步驟如下:(1)膠原紡絲液的配制:將備用的海貍鼠尾筋切成薄片,用無花果蛋白酶進行酶解處理,再用雙氧水溶液殺酶;將殺酶后的切片用蒸餾水沖洗,然后用乙酸溶液溶脹,把溶脹后的切片分散攪拌,然后用濾網(wǎng)過濾,除去雜質(zhì)及不溶脹物,然后把該溶液離心脫泡制得膠原紡絲溶液;(2)手術(shù)縫合線纖維的成形:將膠原紡絲液裝入立式向上濕法紡絲機的紡絲液貯罐中,用氮氣擠壓入含有pH=8-11、質(zhì)量濃度為50-80%的硫酸鈉溶液的立式凝固浴中凝固成型,再經(jīng)過質(zhì)量濃度為60-90%的乙醇水溶液的脫水浴脫水,再經(jīng)過假捻器加捻,合股后再進入含有pH=9-11、質(zhì)量濃度為0.8-1.2%戊二醛的交聯(lián)浴中交聯(lián),經(jīng)過水浴水洗,再經(jīng)第二次加捻,除去水及交聯(lián)劑,干燥后,在卷繞輥上卷繞即得手術(shù)縫合線。在以小鼠為模式生物進行科學研究的實驗室中。合肥正規(guī)鼠尾膠原進貨價
酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。南昌鼠尾膠原廠家
膠原蛋白的適用征狀:1、由于工作勞累,睡眠不足形成的皮膚晦暗無光、發(fā)黃、皮膚彈性差等皮膚衰老的不良癥狀。2、由于年齡、太陽輻射因素引起的皮膚松弛、下垂、皺紋、干燥等皮膚衰老現(xiàn)象。3、由于體內(nèi)異常黑色素分泌旺盛,大量沉積皮膚表面,肌膚不能及時代謝出異常黑色素,形成各種色斑。4、由于長期戶外活動及皮膚保養(yǎng)不當使膚質(zhì)受到損傷,過早出現(xiàn)細紋,皮膚干燥、脫皮、、毛孔粗大等不良癥狀。5、由于內(nèi)分泌功能紊亂,皮膚膚質(zhì)差、皮膚發(fā)油、發(fā)暗,易長青春痘留下的色印、色素沉著等。6、由于生活無規(guī)律,吸煙等因素,造成的黑眼圈,眼袋等問題。7.長期電腦旁工作,電腦輻射造成脫發(fā),內(nèi)分泌紊亂問題。南昌鼠尾膠原廠家
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...