對于生物科研汪們來說,大白鼠、小白鼠們簡直渾身是寶,從毛發(fā)、皮膚,到心肝脾肺,甚至各種排泄物,都是我們重要的研究對象。尾巴,自然也是。所以耗子尾汁不僅存在,甚至是我們生物實(shí)驗(yàn)中必不可少的實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)對象。有不少人靠「耗子尾汁」發(fā)了CNS和頂刊。沒有「耗子尾汁」,很多課題可能都沒辦法開展。在以小鼠為模式生物進(jìn)行科學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)室中,日常和基本的一個實(shí)驗(yàn)就是提取它們的遺傳物質(zhì)—DNA(脫氧核糖核酸)進(jìn)行基因型鑒定,檢測這些小動物的基因組中是否含有特定的DNA??梢岳斫鉃榻o小動物做核酸檢測。使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進(jìn)行酶解。合肥正規(guī)鼠尾膠原價格
鼠尾膠原醋酸溶解:1.將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5.從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,這時候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。北京鼠尾膠原直銷廠家鼠尾膠原,是一種細(xì)胞支持物,它是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成份。
I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法,經(jīng)過乙酸抽提、離心、滅菌、透析等步驟制備得到的高純度、高活性膠原蛋白,屬于醫(yī)藥級別產(chǎn)品,可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿(單分子層包被),適合多種類型細(xì)胞的貼壁如肝臟細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、胚胎細(xì)胞、肌細(xì)胞、肺細(xì)胞、神經(jīng)鞘細(xì)胞等。I型膠原蛋白包被細(xì)胞培養(yǎng)板,規(guī)格為6/24孔板,表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附。使用這種細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞,可以獲得良好的細(xì)胞貼壁率,細(xì)胞增殖速度快,形態(tài)均一,細(xì)胞培養(yǎng)成功率高。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,pH左右時可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。膠原蛋白按其應(yīng)用可以分為食品級、一般級、醫(yī)藥級。
鼠尾Ⅰ型膠原:選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。目前,臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植。其中,人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機(jī)礦物材料[1-2],由于不含自體骨組織中的有機(jī)大分子Ⅰ型膠原蛋白,其臨床療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于自體骨組織。但是,自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織,數(shù)量有限,難以滿足臨床需要。因此,研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo)。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物,在分子結(jié)構(gòu)上,羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板,呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙,沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu),酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白,重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維,然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化,通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。制備鼠尾膠原:取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘。南昌正規(guī)鼠尾膠原報價
4°C沉淀10小時,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀。合肥正規(guī)鼠尾膠原價格
鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3)在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4)在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,混勻,冰上備用。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6)使用時,無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。合肥正規(guī)鼠尾膠原價格
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B.含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...