RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法:1、RNA降解:可能是提取樣本本身降解,或者是在提取過程中導(dǎo)致的降級(jí);應(yīng)當(dāng)盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取,采集的樣本應(yīng)當(dāng)及時(shí)置于液氮或者-80℃冰箱凍存,并減少反復(fù)凍融。在RNA提取過程中應(yīng)當(dāng)使用RNase/DNasefree的吸頭、離心管及其他材料,提取過程盡可能的快,提取后的RNA應(yīng)置于冰盒上并及時(shí)放于-80凍存。如提取后的RNA需要進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè),則應(yīng)提取好后立刻進(jìn)行電泳,電泳緩沖液應(yīng)更換新配制的。2、鹽及有機(jī)溶劑殘留:提取試劑中含有酚及胍鹽,洗滌液中含有乙醇,在提取過程中裂解液吸棄不徹底,洗液沒有充分晾干導(dǎo)致的,殘留的鹽及有機(jī)溶劑對(duì)后續(xù)的逆轉(zhuǎn)錄和PCR均存在不同程度的壓制作用,因此在提取過程中應(yīng)充分去除組織裂解液,洗滌時(shí)應(yīng)充分,使管壁四周均能被洗滌到,另外管子空離和吹風(fēng)是必須的步驟,會(huì)進(jìn)一步降低有機(jī)物殘留。植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn):用途植物RNA提取試劑可從植物Chemicalbook組織。天津正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家
植物RNA提取:植物組織中,富含酚類化合物,或富含多糖,或含有某些尚無法確定的次級(jí)代謝產(chǎn)物,或RNase的活性較高。這些物質(zhì)在細(xì)胞裂解后與RNA緊密結(jié)合形成難溶復(fù)合物或者膠狀沉淀,很難將其去除。所以我們?cè)谔崛≈参锝M織時(shí),要選取針對(duì)植物的試劑盒,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題。1、植物的果皮、果肉、種子、葉片等要在研缽中充分研磨,研磨過程中液氮要及時(shí)補(bǔ)充,避免樣品融化,研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻,避免RNA降解。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,則應(yīng)適當(dāng)減少提取用量,否則組織研磨及裂解不徹底,會(huì)使提取的RNA產(chǎn)量較低。3、含水分較多的植物組織例如石榴果實(shí)、西瓜果實(shí)、桃子果實(shí)等則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量(可選100~200mg)。4、植物組織,如植物葉片、根莖、堅(jiān)硬的果實(shí)等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份,再繼續(xù)進(jìn)行提取步驟。常規(guī)的組織勻漿機(jī)對(duì)植物組織的勻漿效果可能不佳,一般不建議使用。天津RNA提取試劑單價(jià)植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn):RNA純度更高,無雜質(zhì)殘留,特別適合于對(duì)純度要求很高的下游實(shí)驗(yàn)。
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8°C可以保存一周,-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短,容易降解,建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),如反轉(zhuǎn)錄成cDNA,NorthernBlot等
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒:1、多糖多酚植物RNA提取試劑盒整合了在提取過程中去除干擾物的技術(shù),已成功用于葡萄,中草藥等多糖含量高的樣品,成功用于棉花等多酚含量高的樣品。另外華越洋還開發(fā)了糖類清理劑,PCR壓制物清理劑,核酸提取優(yōu)化劑,樣品核酸穩(wěn)定劑,RNA組織樣品保存液等核酸提取輔助產(chǎn)品。2、適用材料普遍:尤其適合解決多醣多酚,色素等次級(jí)代謝物豐富的植物樣本難題。昆蟲RNA柱式提取試劑盒特點(diǎn):操作簡(jiǎn)單快速,處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。RNA純度高,平均OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)昆蟲中的多糖污染。適用于各種昆蟲組織,每100mg組織能提取到20~30μg總RNA。得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。拭子RNA提取試劑的選擇?操作簡(jiǎn)便性。
RNA提取試劑注意事項(xiàng):1、必須戴一次性手套操作,且盡量不要對(duì)著RNA樣品說話,以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。2、TRIReagent含有毒物質(zhì)苯酚,避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛,請(qǐng)戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏。如皮膚接觸TRIReagent,請(qǐng)立即用大量去垢劑和水沖洗,如仍有不適,請(qǐng)聽取醫(yī)生意見。3、TRIReagent抽提總RNA的同時(shí),理論上也可抽提蛋白和DNA,但未經(jīng)測(cè)試。4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。是基于異硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細(xì)胞和組織中提取總RNA的試劑,在樣品裂解或勻漿過程中取出水相,用異丙醇可沉淀回收RNA;中間層用乙醇沉淀可回收DNA;有機(jī)相用異丙醇沉淀可回收蛋白。植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn):是富含多酚或淀粉的植物組織中,提取高純度的總RNA。天津RNA提取試劑單價(jià)
提取的RNA樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶存在壓制作用的有機(jī)溶劑及過高濃度的金屬離子。天津正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對(duì)于動(dòng)物組織、簡(jiǎn)單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無需苯酚氯仿抽提等步驟,簡(jiǎn)單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成~天津正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在7...