以鼠尾膠原為支架的類似物的建立：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，制備鼠尾膠原，將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物，該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ)；②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性，它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型。使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。無錫重慶鼠尾膠原

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。徐州正規(guī)鼠尾膠原單價(jià)制備鼠尾膠原：吸取上清，分裝成小瓶，4℃保存。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積，混勻，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí)。6）使用時(shí)，無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。

鼠尾膠原蛋白耗子尾汁還能變得更加，一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴，制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提、氯化鈉沉淀和磷酸氫二鈉沉淀等步驟，才能從鼠尾中獲得珍貴的膠原蛋白。這種膠原蛋白在37℃的條件下會(huì)形成3股螺旋結(jié)構(gòu)，可以用來當(dāng)作細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì)。細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面（懸浮培養(yǎng)細(xì)胞除外）才能完成生長過程，而有一些細(xì)胞卻總是不太給力，自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難，這個(gè)時(shí)候鼠尾膠原蛋白就能承擔(dān)起讓細(xì)胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層（coating），給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后，細(xì)胞就能更好地貼附上去，除了培養(yǎng)皿，一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細(xì)胞，同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細(xì)胞貼壁生長。將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱，真空冷凍干燥備用。

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,對(duì)于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究。目的:探討鼠尾膠原對(duì)過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實(shí)驗(yàn)組)和普通培養(yǎng)皿(對(duì)照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細(xì)胞存活率,TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá)。鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過夜。貴陽正規(guī)鼠尾膠原廠家供應(yīng)

鼠尾型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。無錫重慶鼠尾膠原

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。無錫重慶鼠尾膠原