鼠尾膠原:1實驗制備:實驗設(shè)備及材料:大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養(yǎng)瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。實驗內(nèi)容:1、制備鼠尾膠原(兩個同學一組操作)。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。實驗步驟:制備鼠尾膠原:1、取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘;2、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的較高,折斷尾骨后拉出尾腱;3、將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡;4、重復步驟2、3,直至尾腱量夠用;5、吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克)。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。上海鄭州鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。杭州正規(guī)鼠尾膠原生產(chǎn)廠家堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血的優(yōu)點:1、本發(fā)明制作的止血材料采用溫和的冷凍干燥操作工藝不光光提高了生產(chǎn)效率,同時避開了使用其他設(shè)備帶來的成本上升問題。2、本發(fā)明專利生產(chǎn)的止血材料(止血海綿),其動物實驗表明其具有非常好的止血效果。也可應(yīng)用于內(nèi)臟出血。具有廣闊的應(yīng)用前景。3、本發(fā)明制備的止血材料具有可完全被人體吸收,與出血創(chuàng)面一接觸,其接觸面迅速形成凝膠而粘附在出血創(chuàng)面上,外面則形成連續(xù)的壓迫干層。啟動凝血因子。同時,聚乙烯醇為成膜材料,兩種的協(xié)同效應(yīng)形成了一種理想的止血狀態(tài)和結(jié)構(gòu)。
鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理,收集上清液;在冰水浴中,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液;在冰水浴中,調(diào)節(jié)pH=6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時,去除上清液,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀。鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,它具有促進體外培養(yǎng)細胞(特別是上皮細胞)貼壁的作用。
鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統(tǒng)的研究提供科學有效的方法。方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細胞,培養(yǎng)7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率。結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規(guī)則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接;同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的。結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。通常情況下骨質(zhì)總量中的鈣、鎂、磷等無機物質(zhì)光占總量的百分之幾而膠原蛋白等有機物質(zhì)卻要占超過80%。蕪湖鼠尾膠原進貨價
結(jié)論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁。上海鄭州鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法。各個材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水,采用冷凍干燥工藝制備。本發(fā)明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備,較傳統(tǒng)的止血材料不可吸收、容易引起機體過敏、止血效果差等缺點,本發(fā)明所制備的止血材料具有人體內(nèi)可吸收,生物相容性好;止血效果快,具有很強的親水性;同時可啟動血小板的凝聚,一旦血小板凝聚,就可形成血栓,進而促使血漿結(jié)塊阻止血流。同時,膠原表面的特定區(qū)域可以與細胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結(jié)合,可以起到防止腸粘連的功效。上海鄭州鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B.含細胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,加入適...