RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法:1、RNA降解:可能是提取樣本本身降解,或者是在提取過程中導(dǎo)致的降級;應(yīng)當(dāng)盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取,采集的樣本應(yīng)當(dāng)及時置于液氮或者-80℃冰箱凍存,并減少反復(fù)凍融。在RNA提取過程中應(yīng)當(dāng)使用RNase/DNasefree的吸頭、離心管及其他材料,提取過程盡可能的快,提取后的RNA應(yīng)置于冰盒上并及時放于-80凍存。如提取后的RNA需要進(jìn)行凝膠電泳檢測,則應(yīng)提取好后立刻進(jìn)行電泳,電泳緩沖液應(yīng)更換新配制的。2、鹽及有機(jī)溶劑殘留:提取試劑中含有酚及胍鹽,洗滌液中含有乙醇,在提取過程中裂解液吸棄不徹底,洗液沒有充分晾干導(dǎo)致的,殘留的鹽及有機(jī)溶劑對后續(xù)的逆轉(zhuǎn)錄和PCR均存在不同程度的壓制作用,因此在提取過程中應(yīng)充分去除組織裂解液,洗滌時應(yīng)充分,使管壁四周均能被洗滌到,另外管子空離和吹風(fēng)是必須的步驟,會進(jìn)一步降低有機(jī)物殘留??俁NA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。貴陽正規(guī)RNA提取試劑推薦廠家
血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對血清、血漿樣本中miRNA提取而開發(fā)的,利用吸附柱法從血清、血漿樣品中簡單快捷提取高純度高質(zhì)量的miRNA。該試劑盒中的裂解液miRBP1及柱結(jié)合液miRBP2具有高效裂解及提取效果。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料,對RNA尤其是smallRNA(<200nt)具有結(jié)合能力,與常用的抗凝劑(包括肝素、EDTA、檸檬酸鈉、草酸鈉)兼容,得到的miRNA可直接用于RT-PCR和Northern雜交等后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作。普通植物總RNA提取試劑盒:采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱,可以從普通植物的根、莖、葉中快速提取總RNA,30~40分鐘內(nèi)即可完成提取過程,提取的總RNA純度高,沒有DNA和蛋白質(zhì)的污染,適用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot雜交等實(shí)驗(yàn)??俁NA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。高效去除植物組織中的色素、酚類等雜質(zhì),提取RNA的純度高,產(chǎn)量大。南京正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦RNA提取試劑注意事項(xiàng):間層用乙醇沉淀可回收DNA。
昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。加0.7mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。加0.3mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。此步可以省略。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50~100μLRNA洗脫液,室溫放置1~2分鐘。12000rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用
RNA極速提取試劑盒:本試劑盒采用獨(dú)特的裂解液,可快速可靠從組織、細(xì)胞、抗凝全血、病毒液樣本中純化出高純度的總RNA。該RNA提取試劑盒是目前國際上操作步驟較少、用時較短的RNA提取試劑盒。應(yīng)用本試劑盒提取的RNA可直接用于反轉(zhuǎn)錄、基因克隆、定量檢測、文庫構(gòu)建、雜交等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。RNA極速提取試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn):1.用時較短:極強(qiáng)的裂解能力使得樣品瞬間裂解,組織細(xì)胞樣品可在5分鐘內(nèi)完成總RNA的提取。2.超高純度:該試劑盒采用柱式純化,獲取的RNAA260/A280為2.0~2.2,A260/A230為1.9~2.1。3.高質(zhì)量RNA:使用該試劑盒獲取的RNA完整性良好。4.使用安全:無需酚/氯仿抽提,減少了有毒有害物質(zhì)。5.操作極簡化:只需將樣品與裂解液A和B混合,經(jīng)一步掛柱和洗脫即可獲得高質(zhì)量總RNA。RNA 提取關(guān)鍵點(diǎn)病菌 RNA 在提取后也仍然具有傳染性。
miRNA是一類內(nèi)源性的約22個核苷酸的非編碼RNA分子,可參與轉(zhuǎn)錄后的基因調(diào)控。在細(xì)胞的分化和發(fā)育,細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和對傳染的應(yīng)答等生物學(xué)過程中,miRNA發(fā)揮了重要作用。成熟的miRNA主要通過翻譯壓制來調(diào)控內(nèi)源性基因的表達(dá)。miRNA的應(yīng)用有miRNA模擬物和壓制劑。miRNA模擬物是化學(xué)合成的雙鏈RNA分子,通過傳染到細(xì)胞中,模擬成熟的內(nèi)源性miRNA分子;miRNA壓制劑是單鏈經(jīng)過修飾的RNA分子,通過傳染到細(xì)胞中,特異性的壓制miRNA的功能。miRNA模擬物和壓制劑可以用于研究單個miRNA錯誤調(diào)節(jié)所造成的生物學(xué)影響,也能用于確定某個miRNA分子的特異性靶標(biāo)基因。同時有研究發(fā)現(xiàn)miR-143可調(diào)控KRAS原病基因,為病癥的醫(yī)治提供了新的靶點(diǎn)和醫(yī)治方法。RNA提取試劑注意事項(xiàng):硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細(xì)胞和組織中提取總RNA的試劑。深圳RNA提取試劑進(jìn)貨價
研缽150度烘烤4小時,離心管、吸頭用DEPC處理。貴陽正規(guī)RNA提取試劑推薦廠家
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時,操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對于動物組織、簡單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無需苯酚氯仿抽提等步驟,簡單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成貴陽正規(guī)RNA提取試劑推薦廠家
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...