眾所周知,RNA提取是一項困難的工作。常見的挑戰(zhàn)包括RNA降解、低產率和/或純度以及DNA污染。此外,不同的樣品類型有自己獨特的特性,需要特別注意。例如,微生物(如革蘭氏陽性/陰性細菌、菌類、古生菌等)的細胞壁堅硬,不易被化學和酶解。其他樣本類型,如糞便和植物含有壓制劑(如多酚類、腐殖酸/黃腐酸、單寧酸等),可與RNA共沉淀,并可壓制下游分析,如RT-qPCR。RNA是不穩(wěn)定的,極易降解。許多樣品含有高水平的RNase,會快速降解RNA。為了使之較小化,較好在采集時穩(wěn)定樣本中的RNA。常用的樣品穩(wěn)定方法包括液氮快速冷凍、干冰乙醇浴或-80°C冷凍室。然而,這些方法也有缺點,如核酸的凍融損傷,并不是所有的研究人員在采集樣品時都能立即使用這些方法。RNA提取試劑注意事項:盡量不要對著RNA樣品說話,以防RNA酶污染。上海RNA提取試劑價格
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,內含異硫氰酸胍等物質,能迅速裂解細胞,壓制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機相。RNA存在于水相中。水相轉移后,RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機相得到蛋白質。南昌正規(guī)RNA提取試劑推薦廠家好的試劑盒價格比較貴,在實驗室可以根據(jù)自己的實驗需要來定奪試劑盒的使用。
科學家曾經在實驗室里就成功地讓RNA實現(xiàn)了自我復制的功能。不僅如此,還有科學家構建了一種DNA-RNA雜交基因組的大腸桿菌。這個實驗證明,即使有DNA-RNA的雜交鏈的中間態(tài),生物也不至于會死亡。所以,RNA較早可能給就是生物的遺傳物質,只是后來逐步被替代了。當然,還有一些次要的原因,比如,我們都知道DNA是在細胞核當中的,完成生命活動這些步驟其實都在細胞核外進行,因此這樣其實更加安全。而如果是RNA,那就沒有必要存在細胞核了,但是當細胞損失時,就很容易出現(xiàn)問題。因此,DNA后來逐漸取代了RNA作為生物的遺傳物質。但這并不是說RNA不能夠作為遺傳物質,相反它是可以作為遺傳物質而存在的。
拭子RNA提取試劑的選擇?應有較高的提取得率。對離心柱法而言,拭子核酸得率的高低,主要取決于離心柱對核酸的吸附能力、洗脫能力以及裂解液的裂解消化能力。離心柱的硅膠膜RNA吸附性能好、裂解液細胞裂解能力強、洗脫液洗脫能力好,核酸的提取得率就高。反之,如果離心柱硅膠膜吸附能力不好,裂解液和洗脫液沒有經過很好的優(yōu)化,RNA的提取得率就不高。至于RNA提取得率的確定,我們可以使用紫外分光光度法,但是不能作為判斷得率的單獨標準,較好還是要做個PCR或熒光定量。用于各種植物、動物、微生物的RNA提取,在每個試劑盒里都有一份說明使用說明書。
RNA是核糖核酸,是存在于生物細胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA是由核糖核苷酸經磷酸二酯鍵縮合而成的長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子則由磷酸,核糖和堿基構成。在細胞中,根據(jù)結構功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA、rRNA,以及mRNA。mRNA是依據(jù)DNA序列轉錄而成的蛋白質合成模板;tRNA是mRNA上遺傳密碼的識別者和氨基酸的轉運者;rRNA是組成核糖體的部分,而核糖體是蛋白質合成的機械。細胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,可調節(jié)基因表達。而其他如I、II型內含子、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應過程的活性,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶。總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實驗操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。昆明正規(guī)RNA提取試劑供應商
RNA提取試劑注意事項:耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶。上海RNA提取試劑價格
超快速多糖多酚植物RNA提取試劑盒:無DNA污染,可直接反轉錄,熒光定量,不會出現(xiàn)洗脫液含絡合Mg離子成分,壓制后續(xù)PCR反應的情況。本試劑盒提取的RNA可直接用于對前期RNA提取質量非常高的后續(xù)實驗,如轉錄組RNA測序,制作基因芯片,熒光定量PCR,核酸雜交,反轉錄等所有后續(xù)實驗。一個樣十多分鐘搞定!具有多糖多酚植物RNA提取試劑盒已普及到全國各大農業(yè)大學,農科院,植物所等相關院校單位,包括中國農業(yè)大學,中國農業(yè)科學院生物技術所,作物所,蔬菜所,多糖多酚植物RNA提取試劑盒由華越洋自主研發(fā)生產,博取眾家之長,根據(jù)多年來市場反饋不斷進行技術升級和改良得來。具有操作步驟少,實驗快捷,RNA產量純度高,充分滿足后續(xù)實驗要求的需要,適用提取樣品普遍等特點。產量:每100mg樣品提取的RNA平均值在20-50ug不等。純度:OD值一般在1.9以上。上海RNA提取試劑價格
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...