安德魯·法爾稱(chēng):“克雷格和我的工作是研究為什么一些基因會(huì)停止運(yùn)行,我們?cè)噲D去控制它們,我們發(fā)現(xiàn)了一些東西可以有效地中止它們。這些基因并不能告訴你它們能做什么,所以如果你能中止它們,你就可以開(kāi)始了解它們能做什么。不過(guò),較初發(fā)現(xiàn)RNA現(xiàn)象的是一位華人學(xué)者,非常可惜,他沒(méi)有進(jìn)一步弄清這是為什么?!倍税l(fā)現(xiàn)的是一個(gè)有關(guān)控制基因信息流程的關(guān)鍵機(jī)制。人們的基因組通過(guò)從細(xì)胞核里的DNA向蛋白質(zhì)的合成機(jī)制發(fā)出生產(chǎn)蛋白質(zhì)的指令,這些指令通過(guò)mRNA傳送。他們發(fā)現(xiàn)一種可以用特定基因降解mRNA的方式,在這種RNA干擾現(xiàn)象中,雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達(dá)。這項(xiàng)技術(shù)被用于全球的實(shí)驗(yàn)室來(lái)確定在各種病癥中哪種基因起到了重要作用。細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):有效分離和提取細(xì)胞質(zhì)RNA,與細(xì)胞核RNA。杭州開(kāi)封RNA提取試劑
將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50~100μLRNA洗脫液,室溫放置1~2分鐘。12000rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用。昆蟲(chóng)RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。加0.7mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。加0.3mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。此步可以省略。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。杭州太原RNA提取試劑血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專(zhuān)門(mén)針對(duì)血清、血漿樣本中miRNA提取而開(kāi)發(fā)的。
游離RNA(或稱(chēng)循環(huán)RNA,cell-freeRNA,簡(jiǎn)稱(chēng)cfRNA),即存在于細(xì)胞外的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,包括mRNA和RNA,在人的多種體液中被普遍研究并成為疾病無(wú)創(chuàng)性診斷和研究的新分子標(biāo)志物。文獻(xiàn)總結(jié)了以下兩個(gè)方面,一方面游離RNA主要來(lái)源于tumour細(xì)胞,另一方面tumour細(xì)胞來(lái)源有凋亡、壞死、主動(dòng)釋放三種機(jī)制,目前認(rèn)為以凋亡為主。游離RNA的生物學(xué)特征:游離RNA的結(jié)構(gòu)RNA相對(duì)DNA而言,更易被普遍存在的核糖核酸酶所降解,而且病癥患者血清中含有更高濃度的核糖核酸酶,病癥患者血清中以RNA-蛋白脂復(fù)合物化學(xué)組成來(lái)保護(hù)RNA,半衰期大約為2天。本試劑盒采用獨(dú)特的配方和添加劑,能高效的分離血清、血漿及其它無(wú)細(xì)胞體液等樣品中分離出游離的RNA,另外本試劑還可以有效地壓制各種外源性和內(nèi)源性的RNA酶,同時(shí)結(jié)合特制的純化柱,能較大限度的保持RNA的完整性、高得率以及純度,并能保留小RNA,為需要進(jìn)行小RNA研究,如RNA的用戶(hù)提供了強(qiáng)有力的工具。
拭子RNA提取試劑的選擇?1、產(chǎn)品價(jià)格。價(jià)格也是選購(gòu)產(chǎn)品的重要考量因素。對(duì)于絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)如Northern雜交、RT-PCR、RealTimeRT-PCR、cDNA文庫(kù)構(gòu)建等,國(guó)產(chǎn)試劑盒都能滿(mǎn)足質(zhì)量要求。與國(guó)外有名品牌相比,國(guó)產(chǎn)試劑盒的價(jià)格較為便宜,價(jià)格還不到國(guó)外品牌價(jià)格的30%,性?xún)r(jià)比較高。因而,對(duì)于以上實(shí)驗(yàn)建議選用國(guó)產(chǎn)試劑盒。一些經(jīng)費(fèi)不是很多的課題研究或樣本量較大的臨床檢測(cè)項(xiàng)目,特別適合選用國(guó)產(chǎn)試劑盒。2、與國(guó)外有名品牌相比,國(guó)產(chǎn)試劑盒在拭子RNA提取純度上略有不足,但不影響大多數(shù)實(shí)驗(yàn),特別是下游需要PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)和分子雜交類(lèi)實(shí)驗(yàn)。在提取得率上,國(guó)內(nèi)試劑盒與國(guó)外品牌差別不大,而在價(jià)格方面,國(guó)產(chǎn)試劑盒具有比較明顯的優(yōu)勢(shì)。如果經(jīng)費(fèi)充足,RNA純度要求特別高,可考慮選擇Q等國(guó)外有名品牌。如果經(jīng)費(fèi)不多或下游主要做PCR或分子雜交等實(shí)驗(yàn),可考慮選擇性?xún)r(jià)比較高的國(guó)產(chǎn)品牌。RNA提取試劑注意事項(xiàng):溶液需用DEPC水配制。
與DNA不同,RNA一般為單鏈長(zhǎng)分子,很多RNA也需要通過(guò)堿基配對(duì)原則形成一定的二級(jí)結(jié)構(gòu)乃至三級(jí)結(jié)構(gòu)來(lái)行使生物學(xué)功能。RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過(guò)程中的橋梁。在此過(guò)程中,轉(zhuǎn)運(yùn)RNA是攜帶與三聯(lián)體密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基與正在進(jìn)行翻譯的mRNA結(jié)合,而后核糖體RNA將各個(gè)氨基酸殘基通過(guò)肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子。有些生物,例如一些病菌,也直接使用RNA作為遺傳信息的載體,而不是DNA。根據(jù)它們?cè)诓煌腜H值和不同極性溶劑的溶解度不同而使得分開(kāi)。成都正規(guī)RNA提取試劑直銷(xiāo)價(jià)
血漿/血清RNA提取試劑盒:普通植物總RNA提取試劑盒:采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱。杭州開(kāi)封RNA提取試劑
眾所周知,RNA提取是一項(xiàng)困難的工作。常見(jiàn)的挑戰(zhàn)包括RNA降解、低產(chǎn)率和/或純度以及DNA污染。此外,不同的樣品類(lèi)型有自己獨(dú)特的特性,需要特別注意。例如,微生物(如革蘭氏陽(yáng)性/陰性細(xì)菌、菌類(lèi)、古生菌等)的細(xì)胞壁堅(jiān)硬,不易被化學(xué)和酶解。其他樣本類(lèi)型,如糞便和植物含有壓制劑(如多酚類(lèi)、腐殖酸/黃腐酸、單寧酸等),可與RNA共沉淀,并可壓制下游分析,如RT-qPCR。RNA是不穩(wěn)定的,極易降解。許多樣品含有高水平的RNase,會(huì)快速降解RNA。為了使之較小化,較好在采集時(shí)穩(wěn)定樣本中的RNA。常用的樣品穩(wěn)定方法包括液氮快速冷凍、干冰乙醇浴或-80°C冷凍室。然而,這些方法也有缺點(diǎn),如核酸的凍融損傷,并不是所有的研究人員在采集樣品時(shí)都能立即使用這些方法。杭州開(kāi)封RNA提取試劑
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見(jiàn)許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在7...