細胞凍存和復蘇實驗:一般來說,細胞進行轉移和保存,較佳的策略是進行低溫保存(-70℃~-196℃),而細胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時,細胞內的酶活性均已停止,即代謝處于完全停止狀態(tài),故而可以長期保存。細胞低溫保存的關鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程,在此溫度范圍內,冰晶呈針狀,極易招致細胞的嚴重損傷。經過前人的長期試驗,發(fā)現細胞的凍存及復蘇基本原則是慢凍速融,這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。無血清細胞凍存液存儲條件:儲存于4℃以下,質量保障期從產品的生產日期起,為期兩年。上海開封無血清細胞凍存液
凍存細胞注意事項:凍存細胞系以備將來之用時,必須遵守以下原則。我們建議您嚴格遵守您所用細胞系附帶的操作說明,以便獲得較佳結果。在細胞處于生長期密度達到70-90%的情況下進行培養(yǎng)細胞的凍存,并且細胞傳代盡可能靠前。確保凍存前活細胞百分比至少為90%。請注意較佳凍存條件取決于所用細胞系。細胞應緩慢冷凍,可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器,使溫度每分鐘大約降低1°C。必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO或者甘油等冷凍保護劑武漢正規(guī)無血清細胞凍存液哪家好無血清細胞凍存液,為多種保護劑組合。
無血清細胞凍存液與傳統細胞凍存液比較及優(yōu)勢:1.傳統細胞凍存液只適用于含血清細胞的凍存,但并不適用于無血清培養(yǎng)的細胞,例如一些CIK細胞等,而無血清細胞凍存液即適用于含血清細胞的凍存,又適用于無血清細胞的凍存,是一種通用型細胞凍存液,通用于各種動物細胞株;2.傳統細胞凍存液含10%胎牛血清,因血清是動物源性成份,因此病毒、霉菌和支原體等污染的風險很高,而無血清細胞凍存液因不含血清,只含DMSO、葡萄糖等營養(yǎng)成份,較大降低了動物血清來源病毒、霉菌和支原體等污染的風險,確保凍存細胞的安全;3.傳統細胞凍存液含血清,但動物血清成分復雜,個體差異大,且生產來源不穩(wěn)定,因此批次間質量常常不穩(wěn)定,這導致培養(yǎng)細胞的狀態(tài)也會受到影響,而無血清細胞凍存液成分和配比明確,批次間差異很小,能夠保證生長細胞狀態(tài)的穩(wěn)定性,細胞存活率高。
無血清細胞凍存液的用途:用途:1.無血清細胞凍存液用于造血干細胞、間充質干細胞等干細胞的儲存。2.無血清細胞凍存液用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲。3.無血清細胞凍存液用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。無血清細胞凍存液產品性能:1.不含牛血清,無動物源組分。傳統的凍存液,一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。胎牛血清取自牛,因此,難以應用到需要避免接觸動物源的應用領域。用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途,無動物源組分。2.2-8℃即可穩(wěn)定保存,無需冷凍,即取即用。為了避免反復凍融,傳統的細胞凍存液,需要分裝成小管后置于-20℃環(huán)境下保存。無血清細胞凍存液,2-8℃保存即可,無需再進行分裝。無血清細胞凍存液使用方法:選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。
細胞凍存和復蘇操作步驟:細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融”的原則,慢速冷凍可使細胞內的水份滲出細胞外,減少細胞內形成冰晶的機會,快融以保證細胞外結晶快速融化,避免慢速融化水份滲入細胞內,再次形成胞內冰晶造成對細胞的損傷。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。無血清細胞凍存液產品性能:既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存,也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。廈門無血清細胞凍存液推薦廠家
無血清細胞凍存液使用方法:按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。上海開封無血清細胞凍存液
細胞凍存液是如何保護細胞的:細胞這一微小的生命體和地球的其它生命相似,機體的主要成份是由液態(tài)的H2O組成,但是其結構微小復雜,內部任何的物理損傷對于它都是致命的。水在低于零度的條件下會結冰。如果將細胞懸浮在純水中,隨著溫度的降低,細胞內外的水份都會結冰,所形成的冰晶會造成細胞膜和細胞器的破壞而引起細胞死亡,這種因細胞內部結冰而導致的細胞損傷稱為細胞內冰晶的損傷。如果將細胞懸浮在溶液中,隨著溫度的降低,細胞外部的水分會首先結冰,從而使得未結冰的溶液中電解質濃度升高。如果將細胞暴露在這樣高溶質的溶液中且時間過長,細胞膜上脂質分子會受到損壞,細胞便發(fā)生滲漏,在復溫時,大量水分會因此進入細胞內,造成細胞死亡。這種因保存溶液中溶質濃度升高而導致的細胞損傷稱為溶質損傷或稱溶液損傷。上海開封無血清細胞凍存液
細胞凍存液的配制可選用10%的DMSO加上90%的小牛血清,可以現用現配。除了這個方式,還可選擇20%的DMSO機上80%的小牛血清,配成兩倍的儲存液,在使用時細胞懸液和凍存液按照1:1的比例混勻使用,特別的方便。凍存液可直接置于-20攝氏度的環(huán)境中保存。使用細胞凍存液需要注意以下幾點:1、在使用凍存液前,需要確保細胞凍存液已經完全融化,并要輕輕的混勻。對融化后的細胞凍存液要置于4℃的環(huán)境中保存。2、使用凍存液之前應該確保凍存前的細胞生長情況比較良好,比如說細胞需要處于對數生長期,并且凍存的時候存活率大于90%。3、在使用細胞凍存液期間,為了保證可以發(fā)揮較佳的效果,建議將細胞凍存在液氮之中,這...