無血清細(xì)胞凍存液:細(xì)胞凍存及復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中的重要技術(shù),細(xì)胞凍存是細(xì)胞長期保存的重要手段。細(xì)胞凍存液,作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液,其作用是將需要凍存的細(xì)胞懸浮于凍存液,供給細(xì)胞生命代謝所必須的營養(yǎng)物質(zhì),同時(shí)可以防止或減少冷凍冰晶對細(xì)胞的損傷作用。在現(xiàn)有技術(shù)中,一般使用培養(yǎng)基、血清和二甲亞砜(DMSO)按照一定比例混合的方法來凍存細(xì)胞,DMSO用量為10%,過低的DMSO濃度會(huì)導(dǎo)致凍存效果欠佳,但高濃度的DMSO有較大毒性,會(huì)對細(xì)胞體造成傷害;且傳統(tǒng)凍存液配方中所使用的血清成本高,增加動(dòng)物病原污染的可能性。此外,有研究表明長期與胎牛血清接觸的細(xì)胞會(huì)對溶液介質(zhì)中的胎牛血清發(fā)生內(nèi)吞,內(nèi)吞胎牛血清后的間充質(zhì)干細(xì)胞有可能發(fā)生某些蛋白表達(dá)的變化,應(yīng)用于人體后可發(fā)生異種動(dòng)物蛋白引起的免疫反應(yīng),不能直接用于臨床輸注。因此,利用含有血清的凍存液凍存的細(xì)胞會(huì)給臨床使用帶來一定的風(fēng)險(xiǎn)。無血清凍存液用途:無血清細(xì)胞凍存液用于免疫細(xì)胞及干細(xì)胞的存儲(chǔ)。天津無血清細(xì)胞凍存液廠家直銷
無血清細(xì)胞凍存液,通用于人和各種動(dòng)物細(xì)胞株。特別配方(主要成分為DMSO和氨基酸)具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力。不含動(dòng)物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細(xì)胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,也適用于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存。產(chǎn)品特色:不含動(dòng)物源成分,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。成分明確,無批次差異。可直接存放于-80℃冰箱凍存,無需經(jīng)過費(fèi)時(shí)的程序降溫過程(省時(shí)、省力、省錢)。獨(dú)特配方有效提高細(xì)胞凍存存活率及復(fù)蘇率。即用型,無需現(xiàn)配,即開即用。通用型,適用于凍存各種細(xì)胞系,原代細(xì)胞??晌⒘?,原位凍存,例如雜交瘤細(xì)胞的凍存,省時(shí)高效。存儲(chǔ)條件:儲(chǔ)存于4℃以下,質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,為期兩年。3個(gè)月以上沒有使用凍存液計(jì)劃時(shí),盡可能-20℃冷凍保存。為避免重復(fù)凍融過程可能導(dǎo)致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低,推薦將產(chǎn)品分裝成小管后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。鄭州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液服務(wù)電話凍存液中使用的所有原料均應(yīng)符合臨床或藥物需求。
無血清細(xì)胞凍存液的用途:用途:1.無血清細(xì)胞凍存液用于造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等干細(xì)胞的儲(chǔ)存。2.無血清細(xì)胞凍存液用于T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲(chǔ)。3.無血清細(xì)胞凍存液用于其他類型哺乳動(dòng)物細(xì)胞的儲(chǔ)存。無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能:1.不含牛血清,無動(dòng)物源組分。傳統(tǒng)的凍存液,一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。胎牛血清取自牛,因此,難以應(yīng)用到需要避免接觸動(dòng)物源的應(yīng)用領(lǐng)域。用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途,無動(dòng)物源組分。2.2-8℃即可穩(wěn)定保存,無需冷凍,即取即用。為了避免反復(fù)凍融,傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液,需要分裝成小管后置于-20℃環(huán)境下保存。無血清細(xì)胞凍存液,2-8℃保存即可,無需再進(jìn)行分裝。
凍存細(xì)胞注意事項(xiàng):凍存細(xì)胞系以備將來之用時(shí),必須遵守以下原則。我們建議您嚴(yán)格遵守您所用細(xì)胞系附帶的操作說明,以便獲得較佳結(jié)果。在細(xì)胞處于生長期密度達(dá)到70-90%的情況下進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,并且細(xì)胞傳代盡可能靠前。確保凍存前活細(xì)胞百分比至少為90%。請注意較佳凍存條件取決于所用細(xì)胞系。細(xì)胞應(yīng)緩慢冷凍,可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器,使溫度每分鐘大約降低1°C。必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO或者甘油等冷凍保護(hù)劑無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢:即用型,無需現(xiàn)配,直接將細(xì)胞懸浮于凍存液中即可。
細(xì)胞凍存時(shí)間和操作步驟:1、首先我們需要凍存培養(yǎng)液,通常細(xì)胞凍存液含10%的DMSO,或者是甘油、10-20%的小牛血清;、取對數(shù)生長期細(xì)胞,并且還需要用PBS進(jìn)行清洗,需要注意在這里要丟棄掉舊的細(xì)胞凍存液;3.去除PBS,加入適量的胰蛋白酶,以覆蓋住培養(yǎng)皿表面為宜,然后把單層生長的細(xì)胞消化掉;然后離心1000rpm5min時(shí)間;4、去除胰蛋白酶,加入凍存培養(yǎng)液,輕輕吹打使細(xì)胞的分布變得均勻,調(diào)節(jié)細(xì)胞較終的密度為5×106/ml-1×107/ml,需要注意這是較佳的細(xì)胞密度;5、將細(xì)胞裝入凍存管之中,每管的含量應(yīng)該保持在1~1.5ml之間。在凍存管上標(biāo)明細(xì)名稱、時(shí)間、操作者;6、較后要說的就是細(xì)胞凍存的時(shí)間了,對于標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序來說,需要進(jìn)行梯度降溫,降溫速率-1~-2℃/min,一旦溫度達(dá)到-25℃以下時(shí),那么就可增至-5℃~-10℃/min;等到-100℃的時(shí)候,可迅速的放入到液氮之中。在冰袋附近操作時(shí),低溫避免保護(hù)劑對細(xì)胞造成損傷。廈門無血清細(xì)胞凍存液廠家直銷
無血清細(xì)胞凍存液可用于造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等干細(xì)胞的儲(chǔ)存。天津無血清細(xì)胞凍存液廠家直銷
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn):一般來說,細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)移和保存,較佳的策略是進(jìn)行低溫保存(-70℃~-196℃),而細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時(shí),細(xì)胞內(nèi)的酶活性均已停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故而可以長期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程,在此溫度范圍內(nèi),冰晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。經(jīng)過前人的長期試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇基本原則是慢凍速融,這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。天津無血清細(xì)胞凍存液廠家直銷
細(xì)胞凍存液的配制可選用10%的DMSO加上90%的小牛血清,可以現(xiàn)用現(xiàn)配。除了這個(gè)方式,還可選擇20%的DMSO機(jī)上80%的小牛血清,配成兩倍的儲(chǔ)存液,在使用時(shí)細(xì)胞懸液和凍存液按照1:1的比例混勻使用,特別的方便。凍存液可直接置于-20攝氏度的環(huán)境中保存。使用細(xì)胞凍存液需要注意以下幾點(diǎn):1、在使用凍存液前,需要確保細(xì)胞凍存液已經(jīng)完全融化,并要輕輕的混勻。對融化后的細(xì)胞凍存液要置于4℃的環(huán)境中保存。2、使用凍存液之前應(yīng)該確保凍存前的細(xì)胞生長情況比較良好,比如說細(xì)胞需要處于對數(shù)生長期,并且凍存的時(shí)候存活率大于90%。3、在使用細(xì)胞凍存液期間,為了保證可以發(fā)揮較佳的效果,建議將細(xì)胞凍存在液氮之中,這...