外泌體(exosome)是所有細(xì)胞釋放出的細(xì)菌大小的顆粒。它們天然地存在于血液中。根據(jù)來自美國德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心的一項(xiàng)新的研究,對(duì)外泌體進(jìn)行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法。論文通信作者為德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)系研究員RaghuKalluri博士。在這項(xiàng)新的研究中,經(jīng)過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解,增加它們的總存活率。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運(yùn)送小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細(xì)胞中的KRAS突變基因,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負(fù)荷和存活。他們證實(shí)外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,這是因?yàn)檫@些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內(nèi)遷移和進(jìn)入靶細(xì)胞(包括病細(xì)胞)中。活細(xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體,含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA、以及miRNA)。徐州正規(guī)外泌體提取試劑哪家好
外泌體(Exosome)是細(xì)胞主動(dòng)分泌的囊泡樣小體,大小均一,直徑30-200nm,密度1.10-1.18g/ml,來源普遍,幾乎所有細(xì)胞都可分泌,在血液,尿液,唾液,腦脊液,腹水,乳汁等體液中普遍分布。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中。1996年,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),開啟了外泌體蛋白研究的新天地。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運(yùn)輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘。超離法因操作簡(jiǎn)單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受?歡迎,但過程比較費(fèi)時(shí),且回收率不穩(wěn)定,純度也受到質(zhì)疑。珠海正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì)。
外泌體的提取方法,先用含無外泌體血清的培養(yǎng)基對(duì)人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行饑餓培養(yǎng),這樣可使干細(xì)胞處于正常生長(zhǎng)狀態(tài),不會(huì)被克制生長(zhǎng)增殖,其所分泌的外泌體所包含的有效物質(zhì)也更貼近其自然狀態(tài)下的外泌體,然后將含有外泌體的培養(yǎng)上清液進(jìn)行低速差速離心(即先一離心處理、再第二離心處理)以去除細(xì)胞及其碎片,用100kd超濾管對(duì)低速差速離心后的離心液進(jìn)行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液,將超濾液經(jīng)過第三離心處理去除雜質(zhì)后直接用0.22μm過濾器過濾除菌,過濾掉粒徑為220nm以上的物質(zhì),進(jìn)一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液,因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮,這樣過濾除菌效率得到較大提高,較后將濃縮液進(jìn)行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體。
Exosome,中文名外泌體,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸,能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),能很好的保護(hù)其包被的物質(zhì),且能靶向特定細(xì)胞或組織,因此是一種很好靶向給藥系統(tǒng)(targeteddeliverysystem)。用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng):選擇血清還是血漿?推薦大多數(shù)研究選擇血漿。
外泌體在肺病進(jìn)程中的作用:肺病細(xì)胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進(jìn)一些病癥的生長(zhǎng)。據(jù)相關(guān)報(bào)道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進(jìn)一些病癥血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動(dòng)脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進(jìn)肺病的生血管作用。此外,有研究發(fā)現(xiàn),外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達(dá)增加,促使人正常支氣管上皮細(xì)胞出現(xiàn)EMT,從而使肺支氣管正常上皮細(xì)胞出現(xiàn)增殖,遷移能力。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍外泌體提?。捍胖榉ň哂刑禺愋愿摺⒉僮骱?jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)。南昌外泌體提取試劑進(jìn)貨價(jià)
多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。徐州正規(guī)外泌體提取試劑哪家好
外泌體在肺病進(jìn)程中的作用:肺病細(xì)胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進(jìn)一些病癥的生長(zhǎng)。據(jù)相關(guān)報(bào)道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進(jìn)一些病癥血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動(dòng)脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進(jìn)肺病的生血管作用。此外,有研究發(fā)現(xiàn),外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達(dá)增加,促使人正常支氣管上皮細(xì)胞出現(xiàn)EMT,從而使肺支氣管正常上皮細(xì)胞出現(xiàn)增殖,遷移能力。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍。徐州正規(guī)外泌體提取試劑哪家好
外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷:近年來,高通量質(zhì)譜分析被普遍地應(yīng)用于篩選NSCLC外泌體蛋白的研究,這為我們揭示了更多具有生物標(biāo)志物價(jià)值的分子。Birgitte等采用微陣列芯片技術(shù)研究了431例肺病患者和150例對(duì)照者血漿外泌體中的蛋白表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)CD151、CD171和TSPAN8這三種蛋白表達(dá)不光能區(qū)分一些病癥與正常組織,同時(shí)也能區(qū)分各種肺病的組織亞型。此外,聯(lián)合應(yīng)用這三種蛋白診斷NSCLC的AUC達(dá)到0.74。Clark等采用納升液聯(lián)用技術(shù)(nano-ESI-LC-MS/MS)分析了來自正常支氣管上皮細(xì)胞系和兩個(gè)攜帶NSCLC細(xì)胞系的外泌體的蛋白表達(dá)譜,從中篩選出如細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘...