外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?,F(xiàn)已證實(shí)可以分泌外泌體的細(xì)胞有:肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、瘤細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。同時(shí),不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來(lái)完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類(lèi),包括外泌體、微泡和凋亡小體。外泌體提取:樣本的粘度與分離的外泌體純度有顯著的相關(guān)性。杭州正規(guī)外泌體提取試劑進(jìn)貨價(jià)
由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),另一方面也可以作為治病手段,未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問(wèn)題,獲得高純度的外泌體對(duì)后續(xù)的研究至關(guān)重要。據(jù)了解,目前人們多采用超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法實(shí)現(xiàn)外泌體的提取分離。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過(guò)程,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。徐州外泌體提取試劑哪家便宜活細(xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體,含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA、以及miRNA)。
外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經(jīng)過(guò)一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡(jiǎn)稱(chēng)TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡(jiǎn)稱(chēng)NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度快,檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測(cè):外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細(xì)胞質(zhì)蛋白,如肌動(dòng)蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins);使用可截留100KD分子量的膜,通過(guò)離心截留上清中的外泌體,截留完成后。
外泌體的提取分離:1、超速離心法(差速離心)。超離法是常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行(如圖所示),可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過(guò)程比較費(fèi)時(shí),且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類(lèi)型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過(guò)密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時(shí)。無(wú)法實(shí)現(xiàn)臨床的常規(guī)化應(yīng)用。
外泌體(exosomes)是活細(xì)胞經(jīng)過(guò)"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過(guò)程而形成的膜性囊泡,來(lái)源于晚期核內(nèi)體(也稱(chēng)為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時(shí)外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中。人體中幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個(gè)外泌體,大約平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類(lèi),在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細(xì)胞、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。目前人們多采用超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法實(shí)現(xiàn)外泌體的提取分離。金華外泌體提取試劑價(jià)格
外泌體提?。翰钏匐x心。差速離心仍然是較常見(jiàn)的外泌體分離技術(shù)之一。杭州正規(guī)外泌體提取試劑進(jìn)貨價(jià)
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu),天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,Exosome可通過(guò)細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細(xì)胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病杭州正規(guī)外泌體提取試劑進(jìn)貨價(jià)
外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時(shí)也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡(jiǎn)述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過(guò)程,包括除雜、濾膜過(guò)濾、超離等。較后用PBS...