PS不是你想有,想有就能有,迄今為止所發(fā)現(xiàn)的外泌體,并非所有的外膜表面都暴露PS。例如,細(xì)菌來源的外泌體膜表面沒有PS,因此,本款試劑不能提取這種外泌體?,F(xiàn)在的研究尚未得知是否所有的外泌體上都會(huì)露出PS,但是上述的外泌體標(biāo)記根據(jù)細(xì)胞種類不同表現(xiàn)出的信號(hào)強(qiáng)弱差大,通過利用本試劑盒PS親和法捕捉、提取外泌體是較好的方法。:這個(gè)MagCapture?ExosomeIsolationKitPS,1次提取的外泌體量大概是多少?實(shí)驗(yàn)樣品的種類和體積不同,提取的外泌體量也不一樣。Wako的操作實(shí)例中,一次提取操作可獲得蛋白量約30μg/mL(BCA法檢測(cè)),粒子數(shù)1~2×1010(NanoSightLM10檢測(cè))(經(jīng)莫能菌素鈉刺激外泌體分泌的K562培養(yǎng)上清5mL濃縮為1mL后,對(duì)其進(jìn)行提?。A硗?,和光驗(yàn)證了從1mL正常人混合血清提取一次,可回收約34μg/mL蛋白質(zhì)(BCA法檢測(cè)),約5×109/mL的粒子數(shù)(NanoSightLM10檢測(cè))。本試劑盒終可獲得100μL的洗脫液?;罴?xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體,含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA、以及miRNA)。武漢正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦
外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度快,檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測(cè):外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細(xì)胞質(zhì)蛋白,如肌動(dòng)蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins);徐州外泌體提取試劑廠家批發(fā)價(jià)由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì)。
外泌體的提取、分離方法:開發(fā)高效、快速、穩(wěn)定,并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法,是目前外泌體應(yīng)用于臨床的基礎(chǔ)和前提。從細(xì)胞上清和體液中提取分離外泌體的方法很多,但是外泌體的純度和產(chǎn)量卻和分離方法息息相關(guān)。通常分離步驟少、產(chǎn)率高,但是純度會(huì)受到影響。鑒于每種分離方法都有其優(yōu)缺點(diǎn),實(shí)驗(yàn)可以根據(jù)樣本來源、下游實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡龋x擇合適的外泌體分離方法。2015年,國際囊泡組織(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,簡單依靠一種分離方法得到的外泌體的純度和產(chǎn)量都難滿足實(shí)驗(yàn)的需求。因此,推薦聯(lián)合使用各種方法,從而得到高純度和高產(chǎn)量的外泌體。
外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):純化和富集的完整血漿/血清,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體的可用于功能研究;樣本輸入量多樣;無需耗時(shí)的超速離心,過濾或特殊注射器;無需沉淀試劑,也無需過夜培養(yǎng);無需蛋白酶處理;適用于多種物種;外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白;可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評(píng)估近似外泌體大小范圍和濃度。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡。它普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子,形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):純化和富集的完整血漿/血清,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體可用于功能研究。
外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時(shí)也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程,包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)。武漢正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦
外泌體的提取方法:色譜法。武漢正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦
外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,組分經(jīng)過優(yōu)化處理,適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、尿液及其他體液(腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項(xiàng):1.對(duì)于待測(cè)樣品粘度過大時(shí),可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理。2.當(dāng)血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時(shí),可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過EPF柱離心。3.針對(duì)外泌體標(biāo)志蛋白(CD63,CD9,CD81等)進(jìn)行Westernblot檢測(cè),可以鑒定所提的外泌體。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量武漢正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦
腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程,包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培...