動(dòng)物細(xì)胞RNA提?。?、懸浮細(xì)胞:可直接離心后棄掉培養(yǎng)基,用無菌PBS清洗1~2遍后,再用適量PBS懸浮起來,然后再加入裂解液進(jìn)行裂解。千萬不要完全棄掉液體后,往沉淀細(xì)胞里直接加入裂解液,這樣會(huì)使外表層的細(xì)胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細(xì)胞外側(cè),從而限制沉淀內(nèi)部的細(xì)胞與裂解液的接觸,從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解不徹底,降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細(xì)胞:棄掉培養(yǎng)基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿,把細(xì)胞吹下來,轉(zhuǎn)移到無RNA酶的EP管中,加裂解液進(jìn)行提取。細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):細(xì)胞質(zhì)RNA不含DNA,直接用于RT-PCR/qRT-PCR。蘇州RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨
拭子RNA提取試劑的選擇?1、產(chǎn)品價(jià)格。價(jià)格也是選購產(chǎn)品的重要考量因素。對(duì)于絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)如Northern雜交、RT-PCR、RealTimeRT-PCR、cDNA文庫構(gòu)建等,國產(chǎn)試劑盒都能滿足質(zhì)量要求。與國外有名品牌相比,國產(chǎn)試劑盒的價(jià)格較為便宜,價(jià)格還不到國外品牌價(jià)格的30%,性價(jià)比較高。因而,對(duì)于以上實(shí)驗(yàn)建議選用國產(chǎn)試劑盒。一些經(jīng)費(fèi)不是很多的課題研究或樣本量較大的臨床檢測項(xiàng)目,特別適合選用國產(chǎn)試劑盒。2、與國外有名品牌相比,國產(chǎn)試劑盒在拭子RNA提取純度上略有不足,但不影響大多數(shù)實(shí)驗(yàn),特別是下游需要PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)和分子雜交類實(shí)驗(yàn)。在提取得率上,國內(nèi)試劑盒與國外品牌差別不大,而在價(jià)格方面,國產(chǎn)試劑盒具有比較明顯的優(yōu)勢。如果經(jīng)費(fèi)充足,RNA純度要求特別高,可考慮選擇Q等國外有名品牌。如果經(jīng)費(fèi)不多或下游主要做PCR或分子雜交等實(shí)驗(yàn),可考慮選擇性價(jià)比較高的國產(chǎn)品牌。珠海正規(guī)RNA提取試劑單價(jià)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):試劑盒可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或者組織樣品的提取。
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒:1、多糖多酚植物RNA提取試劑盒整合了在提取過程中去除干擾物的技術(shù),已成功用于葡萄,中草藥等多糖含量高的樣品,成功用于棉花等多酚含量高的樣品。另外華越洋還開發(fā)了糖類清理劑,PCR壓制物清理劑,核酸提取優(yōu)化劑,樣品核酸穩(wěn)定劑,RNA組織樣品保存液等核酸提取輔助產(chǎn)品。2、適用材料普遍:尤其適合解決多醣多酚,色素等次級(jí)代謝物豐富的植物樣本難題。昆蟲RNA柱式提取試劑盒特點(diǎn):操作簡單快速,處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。RNA純度高,平均OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)昆蟲中的多糖污染。適用于各種昆蟲組織,每100mg組織能提取到20~30μg總RNA。得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。一站式,提供RNase-free的樣品收集管·
與DNA不同,RNA一般為單鏈長分子,不形成雙螺旋結(jié)構(gòu),但是很多RNA也需要通過堿基配對(duì)原則形成一定的二級(jí)結(jié)構(gòu)乃至三級(jí)結(jié)構(gòu)來行使生物學(xué)功能。RNA的堿基配對(duì)規(guī)則基本和DNA相同,不過除了A-U、G-C配對(duì)外,G-U也可以配對(duì)。在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉(zhuǎn)運(yùn)RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識(shí)別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場所??焖俪绦蛟?5-40分鐘內(nèi)提供高質(zhì)量的總RNA。
miRNA是一類內(nèi)源性的約22個(gè)核苷酸的非編碼RNA分子,可參與轉(zhuǎn)錄后的基因調(diào)控。在細(xì)胞的分化和發(fā)育,細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和對(duì)傳染的應(yīng)答等生物學(xué)過程中,miRNA發(fā)揮了重要作用。成熟的miRNA主要通過翻譯壓制來調(diào)控內(nèi)源性基因的表達(dá)。miRNA的應(yīng)用有miRNA模擬物和壓制劑。miRNA模擬物是化學(xué)合成的雙鏈RNA分子,通過傳染到細(xì)胞中,模擬成熟的內(nèi)源性miRNA分子;miRNA壓制劑是單鏈經(jīng)過修飾的RNA分子,通過傳染到細(xì)胞中,特異性的壓制miRNA的功能。miRNA模擬物和壓制劑可以用于研究單個(gè)miRNA錯(cuò)誤調(diào)節(jié)所造成的生物學(xué)影響,也能用于確定某個(gè)miRNA分子的特異性靶標(biāo)基因。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)miR-143可調(diào)控KRAS原病基因,為病癥的醫(yī)治提供了新的靶點(diǎn)和醫(yī)治方法。帶口罩、帽子,屏住呼吸、不說話,帶乳膠手套并要時(shí)常更換。開封RNA提取試劑哪里買
血漿/血清RNA提取試劑盒:總RNA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。蘇州RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨
植物RNA提取:植物組織中,富含酚類化合物,或富含多糖,或含有某些尚無法確定的次級(jí)代謝產(chǎn)物,或RNase的活性較高。這些物質(zhì)在細(xì)胞裂解后與RNA緊密結(jié)合形成難溶復(fù)合物或者膠狀沉淀,很難將其去除。所以我們?cè)谔崛≈参锝M織時(shí),要選取針對(duì)植物的試劑盒,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題。1、植物的果皮、果肉、種子、葉片等要在研缽中充分研磨,研磨過程中液氮要及時(shí)補(bǔ)充,避免樣品融化,研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻,避免RNA降解。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,則應(yīng)適當(dāng)減少提取用量,否則組織研磨及裂解不徹底,會(huì)使提取的RNA產(chǎn)量較低。3、含水分較多的植物組織例如石榴果實(shí)、西瓜果實(shí)、桃子果實(shí)等則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量(可選100~200mg)。4、植物組織,如植物葉片、根莖、堅(jiān)硬的果實(shí)等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份,再繼續(xù)進(jìn)行提取步驟。常規(guī)的組織勻漿機(jī)對(duì)植物組織的勻漿效果可能不佳,一般不建議使用。蘇州RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在7...