RNA提取試劑注意事項:1、需自備氯仿,異丙醇,DEPC,75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水。2、所有離心管,泵頭及相關(guān)溶液都必須無RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜,然后滅菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(體積比)diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或MiliQ級水中,處理過夜,滅菌即成DEPC水。3、使用凍存的細胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。因為在細胞或組織凍融過程中一些細胞或組織內(nèi)的RNase會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽提RNA,推薦先加入適量TRIReagent,并裂解樣品后凍存。若比值較低,說明有殘余蛋白質(zhì)存在;比值太高,則提示RNA有降解。南京RNA提取試劑哪家好
RNA提取真正需要注意的要點:你的植物組織樣本采樣、保存正常嗎?組織裂解充分了嗎?組織起始量是否過大?起始量過大的話,他們得帶進去多少RNase呀,導(dǎo)致裂解液不能充分壓制內(nèi)源性的RNase,失敗就在預(yù)料之中!你的細胞活性好嗎?細胞都到衰亡期了,你提什么RNA呀;細胞加的那么多,破壁不充分,怎么裂解的好呢,他們本身得帶進去多少內(nèi)源性RNase污染呀!轉(zhuǎn)移液體時吸到沉淀了嗎?吸水相時碰到中間層了嗎?乙醇干燥凈了嗎?裂解樣本的過程是重中之重液氮研磨(手工):要先加液氮預(yù)冷一下研缽,然后研磨,研磨過程要保證研缽中一直有少量液氮,研磨完成一個樣本后,直接加入裂解液渦旋震蕩后放常溫,或者直接丟到液氮中,全部研磨后一起加裂解液。液氮研磨(研磨儀):研磨模塊丟到液氮中預(yù)冷,直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢。在2ml圓底離心管(不需要無酶管,液氮研磨中不破裂就好)中加入5mm鋼珠一粒,放進樣品,投入液氮中預(yù)冷。把所有預(yù)冷好的離心管**研磨模塊中,放進研磨機震蕩20-30秒。完成后馬上加裂解液,渦旋。RNA提取試劑銷售廠家總共可以使用該試劑盒進行50次標(biāo)準提取。南京RNA提取試劑哪家好細胞質(zhì)和細胞核RNA提取試劑盒特點:試劑盒可用于哺乳動物細胞或者組織樣品的提取。
植物RNA快速提取試劑盒:是一種單相RNA快速提取試劑盒,可高效裂解堅固的植物細胞并強烈壓制RNA酶活性。細胞破碎之后,植物多糖立即被PlantRNAtrip獨特的成分結(jié)合。離心抽提步驟將RNA與滅活的RNA酶、蛋白、基因組DNA污染分離,并清理植物多糖多酚以及次生代謝產(chǎn)物。在RNA沉淀之前加入PlantRNAAid清理植物多酚,并清理殘余的多糖。提取可在60分鐘內(nèi)完成,所提取的RNA純度極高,不含DNA和多糖和多酚污染,可用于構(gòu)建cDNA文庫、RT-PCR、Northern轉(zhuǎn)印分析、Poly(A)mRNA純化、體外翻譯、和RNA酶保護實驗。
DNA和RNA的鑒別染色:利用吖啶橙的變色特性可鑒別DNA和RNA。吖啶橙作為一種熒光染料已被用于染色固定,非固定細胞核酸,或作溶酶體的一種標(biāo)記。觀察死亡細胞熒光變色性變化以及區(qū)別分裂細胞和靜止細胞群體。雖然測定DNA和RNA含量時較難獲得好的重復(fù)性結(jié)果,但該方法已被許多實驗室普遍采用。RNA是核糖核酸,DNA是脫氧核酸。區(qū)別:溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇來沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚來沉淀RNA。好的試劑盒價格比較貴,在實驗室可以根據(jù)自己的實驗需要來定奪試劑盒的使用。
動物組織總RNA提?。?、盡量選取新鮮的組織,如果不是新鮮的(較好在三個月之內(nèi)-80℃冰箱或者在液氮中凍存的。在剪取組織時,不要拿到室溫直接剪取,一定要放到冰盒上,盡量避免反復(fù)凍融。2、用干凈的剪刀鑷子剪取一小塊組織,剪取樣本時盡量剪組織中心的部位,或者先將大塊的組織先從中間切開,然后再在新鮮切口的位置剪取樣本。取下的組織要充分的剪碎,將剪碎的組織放到無RNA酶的EP管中,加入裂解液,剪碎的組織要充分接觸裂解液,準備勻漿。3、正常組織選取綠豆粒大?。?0~60mg)的組織進行勻漿,如果組織中含有大量的蛋白、脂肪或者是緊密的纖維組織比如肝臟等,適當(dāng)增減剪取組織的量(可選10~20mg)。4、如果提取的是魚肌肉,蝦肉,海蜇等含水分較多的組織時則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量用量(推薦100~200mg)。5、條件允許的情況下,動物組織使用高通道組織勻漿機勻漿后即可直接進行提取步驟,如沒有該設(shè)備。6、較后提取后得到的RNA一定要立即放到冰盒上,以減少RNA的降解。RNA的堿基配對規(guī)則基本和DNA相同,不過除了A-U、G-C配對外,G-U也可以配對。廈門正規(guī)RNA提取試劑廠家直銷
目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。南京RNA提取試劑哪家好
植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點:1.針對植物材料獨特配置,操作更簡單、流程更優(yōu)化。2.配有高效的DNaseⅠ,可有效去除DNA污染。3.配有CS過濾柱,可有效去除其它雜質(zhì)。4.RNA純度更高,無雜質(zhì)殘留,特別適合于對純度要求很高的下游實驗。5.操作安全可靠,無需酚抽提,無需氯化銫梯度離心,無需氯化鋰或乙醇沉淀。用途植物RNA提取試劑可從植物Chemicalbook組織,特別是富含多酚或淀粉的植物組織中(如馬鈴薯塊莖、白松松針或嫩苗和西紅柿葉等),提取高純度的總RNA。操作步驟先將RNaseFree離心管置于干冰中再放入研磨好的冷凍的組織樣品。準備新鮮植物組織,在液氮中研磨成粉狀,如果是干種子,可在室溫研磨。處理過的植物材料應(yīng)一直保持置于-70℃冷凍保存,直至加入提取試劑并懸浮。南京RNA提取試劑哪家好
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...