所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。1983年,外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。外泌體提取:高速離心以消除更大的囊泡。開封正規(guī)外泌體提取試劑服務電話
所有的細胞都能分泌外泌體,但是不同細胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內含物中都具有很大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞,調控細胞生理活動。同時,外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉化、促進一些病癥發(fā)生和轉移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體相關數(shù)據(jù)庫有哪些?lexoRBase數(shù)據(jù)庫收集和描述人類血液外泌體中所有長的RNA,包括circRNA、lncRNA和mRNA。lEVpedia和Vesiclepedia數(shù)據(jù)庫匯總了不同囊泡研究中發(fā)現(xiàn)的蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。lExoCarta數(shù)據(jù)庫主要收錄了包括人、大鼠、小鼠、綿羊等幾個物種的286個研究結果,涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。合肥外泌體提取試劑報價可將外泌體吸附并分離出來。
具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進行,1、300×g10min,棄沉淀,去除細胞2、2000×g20min,棄沉淀,去除死細胞3、10,000×g30min,棄沉淀,去除細胞碎片等亞細胞成分4、10,000×g70min,棄上清,沉淀即為外泌體5、PBS(每10ml細胞培養(yǎng)液用30mlPBS重懸)清洗沉淀物,混勻,10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀(外泌體),立即使用或置于-80℃?zhèn)溆谩?、一般超速離心法會結合密度梯度離心,這樣得到的外泌體更純,具體做法第4步后蔗糖梯度離心,10,000×g70min,以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優(yōu)點是:成本低,操作簡單,獲得的囊泡數(shù)較多。缺點是:耗時耗力(需用時8-30h,并且每次只能處理6個樣本),獲得的外泌體純度不是很高,高速及重復離心也會對外泌體產生很大的傷害,并且不適用于如血漿和血清等粘性液體生物樣本。
外泌體的提取方法,先用含無外泌體血清的培養(yǎng)基對人脂肪來源間充質干細胞進行饑餓培養(yǎng),這樣可使干細胞處于正常生長狀態(tài),不會被克制生長增殖,其所分泌的外泌體所包含的有效物質也更貼近其自然狀態(tài)下的外泌體,然后將含有外泌體的培養(yǎng)上清液進行低速差速離心(即先一離心處理、再第二離心處理)以去除細胞及其碎片,用100kd超濾管對低速差速離心后的離心液進行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液,將超濾液經過第三離心處理去除雜質后直接用0.22μm過濾器過濾除菌,過濾掉粒徑為220nm以上的物質,進一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液,因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮,這樣過濾除菌效率得到較大提高,較后將濃縮液進行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體。該外泌體的提取方法,既結合了差速離心,又結合了超濾和超速離心,通過該提取流程,較終可高效地從人脂肪來源間充質干細培養(yǎng)上清液中提取到高濃度、高純度的外泌體,具有操作簡單、成本低,適合產業(yè)化生產的特點。將人尿液來源細胞的培養(yǎng)基通過0.22微米濾膜過濾,以去除大的細胞殘片以及其它雜質。
人體幾乎所有類型的細胞都能分泌外泌體,外泌體普遍存在并分布于各種體液中,攜帶多種蛋白質、mRNA、miRNA和脂質類物質等,作為重要的傳遞信號分子,形成了一種全新的細胞-細胞間信息傳遞系統(tǒng),可參與細胞通訊、細胞遷移、血管新生和一些病癥細胞生長等過程。外泌體與微泡:我們知道,細胞間相互作用可以通過釋放蛋白質、核酸、脂質等分子到胞外與受體結合從而介導胞內細胞傳導。除此之外,細胞還可以釋放膜囊泡,外泌體與微泡就是其中兩種,二者相似但形成方式不同:外泌體是細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中的膜囊泡,而微泡則是細胞出芽與細胞膜融合后直接脫落形成的囊泡,且外泌體大小均一,直徑在40~100nm,其大小取決于其起源部位以及細胞中的脂質雙層結構;而微泡大小不一,直徑在50~1000nm之間。唐山正規(guī)外泌體提取試劑產品介紹在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法由于國內有關外泌體提取試劑的缺乏,我國對外泌體的研究還基本依賴于過程繁瑣的超速離心和進口提取試劑盒。貴陽外泌體提取試劑產品介紹
外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:純化和富集的完整血漿/血清,尿液和細胞培養(yǎng)基中外泌體可用于功能研究。開封正規(guī)外泌體提取試劑服務電話
人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節(jié)受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA開封正規(guī)外泌體提取試劑服務電話
CD47是信號調節(jié)蛋白α(SIRPα,也稱為CD172a)的配體,CD47-SIRPα間的結合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號,從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖,增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用,但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性。研究人員發(fā)現(xiàn),CD47和病基因KRAS驅動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性。所以,外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期。外泌體的提取方法:色譜法。溫州正...