外泌體的提取方法:1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵。天津外泌體提取試劑
人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當(dāng)其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合,進而靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合,從而細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA廈門正規(guī)外泌體提取試劑平均價格外泌體提取:高速離心沉淀外泌體。
由歐洲多國細胞外囊泡領(lǐng)域的學(xué)者發(fā)起并成立的國際細胞外囊泡協(xié)會(ISEV)于2014年在協(xié)會會刊JournalofExtracellularVesicles發(fā)表了一個指導(dǎo)性意見,也就是我們常說的MISEV2014。2018版《指導(dǎo)要求》進行了修訂。2018版的《指導(dǎo)要求》首先討論了對這些細胞來源的非細胞具膜結(jié)構(gòu)如何稱呼。學(xué)者們普遍認為應(yīng)當(dāng)使用細胞外囊泡(extracellularvesicle)來稱呼這些具膜囊泡,當(dāng)我們使用常規(guī)方法分離這些結(jié)構(gòu)時不推薦使用其他的名稱來稱呼它們。
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用于外泌體提取的體液收集注意事項:1、選擇血清還是血漿?推薦大多數(shù)研究選擇血漿。血液凝固過程中血小板會產(chǎn)生大量外泌體,含量占血清中外泌體的50%以上,選擇血漿可避免不必要的影響。2、注意抗凝劑的選擇。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān),這可能是因為肝素與引物和/或酶有競爭作用。除了克制PCR,肝素可以與外泌體結(jié)合,阻止細胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達莫(CTAD),CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體。EDTA可能會干擾PCR反應(yīng)(盡管其程度小于肝素),但是還是優(yōu)于其他選擇。此外,有研究表明鈣螯合劑可在體外促進外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量。使用肝素時這種影響就不會發(fā)生,因此建議在測量外泌體的精確數(shù)量時選用肝素。但是也有研究表明肝素可以導(dǎo)致體外條件下外泌體的減少。總之,目前尚需要更多的研究論證抗凝劑是否及如何對外泌體的釋放,作用和下游反應(yīng)產(chǎn)生特異性影響。外泌體提?。簶悠分写蠓肿硬荒苓M入凝膠孔,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,被流動相洗脫出來。鄭州外泌體提取試劑銷售廠家
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外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷天津外泌體提取試劑
外泌體提?。撼叽缗抛枭V。尺寸排阻色譜(Size-exclusionchromatography,SEC)是基于大小而非分子量實現(xiàn)分離大分子。該技術(shù)應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子,分子根據(jù)其直徑通過微球,半徑小的分子需要更長的時間才能通過色譜柱的孔隙遷移,而大分子則從色譜柱中更早地洗脫。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子。此外,可以將不同的洗脫溶液應(yīng)用于該方法。與離心方法相比,色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢,因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,這可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu)。目前,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù)。不過,該方法耗時較長,不適合大量樣本處理。早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集...