鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法。各個材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水，采用冷凍干燥工藝制備。本發(fā)明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備，較傳統(tǒng)的止血材料不可吸收、容易引起機體過敏、止血效果差等缺點，本發(fā)明所制備的止血材料具有人體內(nèi)可吸收，生物相容性好；止血效果快，具有很強的親水性；同時可啟動血小板的凝聚，一旦血小板凝聚，就可形成血栓，進而促使血漿結(jié)塊阻止血流。同時，膠原表面的特定區(qū)域可以與細胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結(jié)合，可以起到防止腸粘連的功效。鼠尾膠原醋酸溶解：在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。武漢正規(guī)鼠尾膠原廠家批發(fā)價

鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗。南京鼠尾膠原平均價格手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

膠原蛋白的提取方法：酶法提取：酶法提取是利用蛋白酶使膠原溶解，水解條件溫和，反應(yīng)速率快，提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結(jié)構(gòu)，蛋白純度高，理化性質(zhì)穩(wěn)定，且無環(huán)境污染。酶法提取常用的蛋白酶有：胃蛋白酶、胰蛋白酶或者復(fù)合酶。工藝可選擇一步法，即利用酶液直接提??；二步法，即先用酸或者堿進行初步提取，然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO預(yù)處理革屑，然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產(chǎn)物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶，再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產(chǎn)物。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白，探討了酶和酶的加入量對提取結(jié)果的影響，給出了酶對膠原提取較佳工藝配比，酶與牛腱的質(zhì)量比為0.1時效果較佳，而使用無花果蛋白酶時，0.01的配比較佳。膠原蛋白就像骨骼中的一張充滿小洞的網(wǎng)，它會牢牢地留住就要流失的鈣質(zhì)。

一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法：一般的生物體中提取的膠原蛋白多為混合型，之前多從牛皮、豬皮、牛腱中提取，但這類膠原蛋白不光有油脂等其他雜質(zhì)，也存在著II型及其他一些膠原蛋白亞型；同時，這種畜牧業(yè)大量飼養(yǎng)的動物存在著例如瘋牛病等一些生物性疾病及病毒傳染，如果用此開發(fā)醫(yī)用產(chǎn)品更加存在著品質(zhì)的不穩(wěn)定及潛在的風(fēng)險及危害；再次，人的真皮中主要含有I型和III型，但III型不易大量獲得，故應(yīng)用單一的I型膠原蛋白是解決體外應(yīng)用的醫(yī)用產(chǎn)品引起的抗原性問題的關(guān)鍵，這也是I型膠原蛋白抗原性低的原因之一。同時，I型膠原蛋白的三重螺旋的氨基酸結(jié)構(gòu)決定了它的一些特有的性能，如機械性能、促進細胞生長、弱抗原性、可生物降解性和膠原的自締合性。制備鼠尾膠原：吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）。珠海正規(guī)鼠尾膠原哪家好

加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。武漢正規(guī)鼠尾膠原廠家批發(fā)價

含細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。加入760μL的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。武漢正規(guī)鼠尾膠原廠家批發(fā)價