具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進行，1、300×g10min，棄沉淀，去除細胞2、2000×g20min，棄沉淀，去除死細胞3、10,000×g30min，棄沉淀，去除細胞碎片等亞細胞成分4、10,000×g70min，棄上清，沉淀即為外泌體5、PBS（每10ml細胞培養(yǎng)液用30mlPBS重懸）清洗沉淀物，混勻，10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀（外泌體），立即使用或置于-80℃?zhèn)溆谩?、一般超速離心法會結(jié)合密度梯度離心，這樣得到的外泌體更純，具體做法第4步后蔗糖梯度離心，10,000×g70min，以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優(yōu)點是：成本低，操作簡單，獲得的囊泡數(shù)較多。缺點是：耗時耗力（需用時8-30h，并且每次只能處理6個樣本），獲得的外泌體純度不是很高，高速及重復(fù)離心也會對外泌體產(chǎn)生很大的傷害，并且不適用于如血漿和血清等粘性液體生物樣本。用于外泌體提取的體液收集注意事項：抽血時間。南昌外泌體提取試劑廠家直銷

外泌體的提取方法，先用含無外泌體血清的培養(yǎng)基對人脂肪來源間充質(zhì)干細胞進行饑餓培養(yǎng)，這樣可使干細胞處于正常生長狀態(tài)，不會被克制生長增殖，其所分泌的外泌體所包含的有效物質(zhì)也更貼近其自然狀態(tài)下的外泌體，然后將含有外泌體的培養(yǎng)上清液進行低速差速離心(即先一離心處理、再第二離心處理)以去除細胞及其碎片，用100kd超濾管對低速差速離心后的離心液進行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液，將超濾液經(jīng)過第三離心處理去除雜質(zhì)后直接用0.22μm過濾器過濾除菌，過濾掉粒徑為220nm以上的物質(zhì)，進一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液，因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮，這樣過濾除菌效率得到較大提高，較后將濃縮液進行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體。該外泌體的提取方法，既結(jié)合了差速離心，又結(jié)合了超濾和超速離心，通過該提取流程，較終可高效地從人脂肪來源間充質(zhì)干細培養(yǎng)上清液中提取到高濃度、高純度的外泌體，具有操作簡單、成本低，適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的特點。北京正規(guī)外泌體提取試劑哪里買外泌體的提取分離：PEG-base沉淀法。

外泌體（exosome）是所有細胞釋放出的細菌大小的顆粒。它們天然地存在于血液中。根據(jù)來自美國德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心的一項新的研究，對外泌體進行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法。論文通信作者為德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)系研究員RaghuKalluri博士。在這項新的研究中，經(jīng)過基因修飾的外泌體（被稱作iExosome）能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子，從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解，增加它們的總存活率。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾（RNAi）的靶向方法：利用這些天然的納米顆粒（即外泌體）運送小干擾RNA（siRNA）或短發(fā)夾RNA（shRNA）分子來靶向胰腺病細胞中的KRAS突變基因，從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負荷和存活。他們證實外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用，這是因為這些納米大小的囊泡（即外泌體）輕松地在體內(nèi)遷移和進入靶細胞（包括病細胞）中。

在無菌條件下提取人體體液，并用PBS緩沖液進行稀釋，然后通過離心篩選初步去除體液中的細胞成分和細胞碎片，制成體液樣本備用；體液樣本純化：通過過濾膜對上述體液樣本進行過濾，進一步去除體液中的細胞殘片及其他雜質(zhì)，靜置10～15分鐘，留取沉淀物備用；外泌體提?。簩⑸鲜龀恋砦镉肞BS緩沖液進行懸浮，使外泌體懸浮于液體上層，然后用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體，置于80℃儲存?zhèn)溆?。此提取方法條件復(fù)雜，成本高，專利申請利用靜置不太可能把外泌體沉降下來；根據(jù)外泌體表面的特異生物化學(xué)特性通過提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體提?。簶悠分写蠓肿硬荒苓M入凝膠孔，只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱，被流動相洗脫出來。

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時，對離心時間極為敏感。用于外泌體提取的體液收集注意事項：抽血技巧。貴陽正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

專利申請利用分離培養(yǎng)人尿液來源細胞并收集培養(yǎng)基來進行體外培養(yǎng)。南昌外泌體提取試劑廠家直銷

外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷：miRNAs是一類含有20～25個核苷酸的非編碼小RNA，能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達，目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中，參與一些病癥的形成和演化過程。單個miRNA可能通過壓制性復(fù)合物與多個mRNA結(jié)合，從而阻滯整個生物通路。因此，外泌體的miRNA具有成為NSCLC標(biāo)志物的優(yōu)勢。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環(huán)游離miRNA的表達，與75例健康者相比，發(fā)現(xiàn)了兩種高表達的miRNA（miR-25和miR-223）。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個miRNA的表達進行了評估，結(jié)果顯示，12個一些病癥相關(guān)的miRNA*在肺病患者中過度表達。Cazzoli等收集了30個血漿樣本，發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA（miR-378a、-379a、-139-5p、-200b-5p）在肺病患者血清中明顯升高，用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積（AUC）為0.908。南昌外泌體提取試劑廠家直銷