細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.不注意細節(jié)在轉(zhuǎn)染之前更換一次37℃預(yù)溫的培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)染效率。脂質(zhì)體和DNA/RNA混合物應(yīng)當(dāng)一滴一滴地滴下來，從培養(yǎng)皿一邊滴到另一邊，邊滴邊輕搖培養(yǎng)皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度。這些都是一些細枝末節(jié)，但是，如果不注意的話，也會造成轉(zhuǎn)染效率低下。2.細胞狀態(tài)不好細胞狀態(tài)不好，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低下。一般進行轉(zhuǎn)染的細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。如果是貼壁細胞的話，貼壁率應(yīng)該在70-80%；如果是懸浮細胞的話，應(yīng)該是6X105個/孔（24孔板），一般是轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在換液，轉(zhuǎn)染前用無血清培養(yǎng)基或PBS洗細胞一次。轉(zhuǎn)染的整個過程都不應(yīng)該有物品。其可降解性對體內(nèi)應(yīng)用也具有重要的意義。徐州長沙細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細胞電轉(zhuǎn)染實驗的幾點建議：1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉(zhuǎn)染實驗非常重要，電場強度不能過高，過高會增加細胞的死亡率；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細胞系具有不同的較佳場強值，實驗前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細胞系的較佳電場強度。2.細胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細胞一般選取處于對數(shù)生長期的細胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）。因為處于對數(shù)生長期的細胞分裂旺盛，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細胞差，電轉(zhuǎn)后，細胞膜的恢復(fù)能力強，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA.杭州成都細胞高效轉(zhuǎn)染試劑細胞易于生長到高密度并合成更多蛋白。

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗，盡量使用開封半年內(nèi)的，因為過了半年后，就算沒有過失效期，但是細胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時加入血清，會導(dǎo)致細胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候，較好不要換液，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清。過早的話，會引起未轉(zhuǎn)染的細胞瘋狂生長。那么，什么是較佳時機呢？在20%的細胞變圓的時候，就是加血清的較佳時機。

如何高效率實現(xiàn)細胞轉(zhuǎn)染：陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑，以其適用宿主范圍廣，操作簡便，對細胞毒性小，轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞。脂質(zhì)體（liposome）是一種人工膜，在水相中形成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的球形封閉囊泡。脂質(zhì)體可以和帶負電荷的核酸結(jié)合后重新形成復(fù)合物，當(dāng)復(fù)合物接近細胞膜時，通過內(nèi)吞作用形成內(nèi)體（endosomes）進入細胞，通過緩沖液的作用以及脂質(zhì)與內(nèi)體膜融合，增大內(nèi)體的內(nèi)部滲透壓，使內(nèi)體結(jié)構(gòu)破壞，釋放出核酸。隨后DNA復(fù)合物被釋放進入細胞核內(nèi)。對于普通細胞系，一般的瞬時轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法較重要的就是防止其毒性，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例，細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素，通過實驗優(yōu)化合適的轉(zhuǎn)染條件對于轉(zhuǎn)染效率的提高很重要。建議選擇50%~80%區(qū)間密度進行細胞轉(zhuǎn)染。

細胞轉(zhuǎn)染那些事兒：1.選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細胞進行轉(zhuǎn)染。對大多數(shù)細胞而言，均需要在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在鋪板，第二天上午進行轉(zhuǎn)染，48h后收集細胞進行功能檢測。對于原代細胞，可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。2.對于貼壁細胞，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日，用胰酶處理為單細胞懸液，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，較好在轉(zhuǎn)染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液。3.支原體污染會嚴重降低細胞轉(zhuǎn)染的效率，且支原體不會像細菌污染那么明顯，因而轉(zhuǎn)染前可用環(huán)丙沙星處理細胞以除去支原體。4.細胞轉(zhuǎn)染時需要一定的細胞密度，以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜。轉(zhuǎn)染 ，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑銷售廠家

重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，較好在轉(zhuǎn)染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液。徐州長沙細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細胞轉(zhuǎn)染效率影響因素：1.細胞密度一般來說，當(dāng)細胞密度達到60%～80%時進行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率，過低或過高都會影響轉(zhuǎn)染效果。2.細胞生長狀態(tài)這點非常關(guān)鍵，很多時候傳代次數(shù)太少或者太多都將導(dǎo)致細胞對轉(zhuǎn)染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性、降低細胞毒性，應(yīng)盡量使用適度傳代的細胞系，并在不同次實驗時保持細胞傳代次數(shù)的一致性。3.細胞種類不同細胞種類的細胞在做轉(zhuǎn)染時所需要的轉(zhuǎn)染體系是不同的，不能一種體系用在所有類型細胞的轉(zhuǎn)染實驗。徐州長沙細胞高效轉(zhuǎn)染試劑