RNA是核糖核酸,DNA是脫氧核酸。區(qū)別:紫外吸收:核酸的λm=260nm,堿基展開程度越大,紫外吸收就越厲害。當(dāng)A=1時(shí),DNA:50ug/ml,RNA和單鏈DNA:40ug/ml,寡核苷酸:20ug/ml。用A260/A280還可來表示核酸的純度。沉降速度:對(duì)于拓?fù)洚悩?gòu)體(核苷酸數(shù)目相同的核酸),其沉降速度從達(dá)到小依次為:RNA;超螺旋DNA>解鏈環(huán)狀DNA;松弛環(huán)狀DNA;線形DNA也就是在離心管中較上層是線形DNA,較下面是RNA。電泳:核苷酸、核酸均可以進(jìn)行電泳,泳動(dòng)速度主要由分子大小來決定,因此,電泳是測(cè)定核酸分子量的好方法。DNA分子量測(cè)定較直接的方法:用適當(dāng)濃度的EB(溴嘧啶)染色DNA,可以將其他形式的DNA變成線形DNA,用電鏡測(cè)出其長(zhǎng)度,按B-DNA模型算出bp數(shù),根據(jù)核苷酸的平均分子量就可計(jì)算出DNA的分子量。植物花總RNA提取試劑盒:特殊的提取緩沖液保證特殊植物材料中的總RNA充分溶解。成都正規(guī)RNA提取試劑哪家便宜
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒1、高純度:試劑盒的進(jìn)口吸附柱具有的專一吸附特性和強(qiáng)吸附力。三管齊下保證所提取RNA的產(chǎn)量和純度,前期得到的高質(zhì)量RNA才能保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)成功,尤其是對(duì)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)等。2、無DNA污染可直接用于熒光定量PCR:目前市面上的試劑盒大多提出的RNA會(huì)出現(xiàn)DNA污染其結(jié)果嚴(yán)重影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),特別是非常靈敏的熒光定量PCR的實(shí)驗(yàn)。一些市面上單獨(dú)賣的去DNA污染的試劑,效果不穩(wěn)定,去除DNA污染不徹底。本產(chǎn)品操作簡(jiǎn)單,去除DNA徹底,得到的RNA樣品可直接用于熒光定量PCR,反轉(zhuǎn)錄等各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)。徐州正規(guī)RNA提取試劑廠家拭子RNA提取試劑的選擇?洗脫液洗脫能力好,核酸的提取得率就高。
在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉(zhuǎn)運(yùn)RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識(shí)別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場(chǎng)所。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,像是組成剪接體的snRNA,負(fù)責(zé)rRNA成型的snoRNA,以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。而其他如I、II型內(nèi)含子、RNaseP、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過程的活性,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶。在病菌方面,很多病菌只以RNA作為其中的遺傳信息載體(有別于細(xì)胞生物普遍用雙鏈DNA作載體)。
經(jīng)典Trizol法并不能獲得總RNA:這個(gè)事實(shí)可能會(huì)刷不少新手甚至老手的三觀,但確有實(shí)驗(yàn)支持:經(jīng)典Trizol法會(huì)選擇性丟失低GC比的miRNA。這一點(diǎn),源自一則作者自撤稿的故事。V.NarryKim是韓國(guó)鼎鼎大名的美女科學(xué)家,專做RNA相關(guān)的研究,包括miRNA。幾年前她們組發(fā)現(xiàn)一個(gè)奇怪的“現(xiàn)象”,即貼壁細(xì)胞在消化之后,會(huì)有一些miRNA的豐度突然降低,看起來好像是被快速“降解”掉了,并據(jù)此寫了一篇文章發(fā)到MolecularCell上。但很快她們就發(fā)現(xiàn),這個(gè)“現(xiàn)象”難以重復(fù):如果用Trizol做實(shí)驗(yàn),就一定是陽(yáng)性結(jié)果,而用試劑盒提RNA,就重復(fù)不出來。難道是號(hào)稱能提總RNA的Trizol方案出了問題?確實(shí)如此。經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn),經(jīng)典的Trizol方案會(huì)使得低GC比的miRNA丟失。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長(zhǎng)鏈狀分子。
RNA極速提取試劑盒:本試劑盒采用獨(dú)特的裂解液,可快速可靠從組織、細(xì)胞、抗凝全血、病毒液樣本中純化出高純度的總RNA。該RNA提取試劑盒是目前國(guó)際上操作步驟較少、用時(shí)較短的RNA提取試劑盒。應(yīng)用本試劑盒提取的RNA可直接用于反轉(zhuǎn)錄、基因克隆、定量檢測(cè)、文庫(kù)構(gòu)建、雜交等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。RNA極速提取試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn):1.用時(shí)較短:極強(qiáng)的裂解能力使得樣品瞬間裂解,組織細(xì)胞樣品可在5分鐘內(nèi)完成總RNA的提取。2.超高純度:該試劑盒采用柱式純化,獲取的RNAA260/A280為2.0~2.2,A260/A230為1.9~2.1。3.高質(zhì)量RNA:使用該試劑盒獲取的RNA完整性良好。4.使用安全:無需酚/氯仿抽提,減少了有毒有害物質(zhì)。5.操作極簡(jiǎn)化:只需將樣品與裂解液A和B混合,經(jīng)一步掛柱和洗脫即可獲得高質(zhì)量總RNA。若比值較低,說明有殘余蛋白質(zhì)存在;比值太高,則提示RNA有降解。廈門正規(guī)RNA提取試劑哪里買
RNA提取試劑注意事項(xiàng):所有離心管,泵頭及相關(guān)溶液都必須無RNA酶污染。成都正規(guī)RNA提取試劑哪家便宜
動(dòng)物細(xì)胞RNA提?。?、懸浮細(xì)胞:可直接離心后棄掉培養(yǎng)基,用無菌PBS清洗1~2遍后,再用適量PBS懸浮起來,然后再加入裂解液進(jìn)行裂解。千萬不要完全棄掉液體后,往沉淀細(xì)胞里直接加入裂解液,這樣會(huì)使外表層的細(xì)胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細(xì)胞外側(cè),從而限制沉淀內(nèi)部的細(xì)胞與裂解液的接觸,從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解不徹底,降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細(xì)胞:棄掉培養(yǎng)基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿,把細(xì)胞吹下來,轉(zhuǎn)移到無RNA酶的EP管中,加裂解液進(jìn)行提取。3、貼壁細(xì)胞:需要先用胰酶消化,然后收集到無RNA酶的EP管中,離心去其上清,用PBS洗1~2次,去除多余的胰酶,以適量PBS重懸后繼續(xù)進(jìn)行提取步驟。成都正規(guī)RNA提取試劑哪家便宜
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在7...