注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。更多Polysciences PEI轉染試劑等相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!近期還有PEI試用裝申請活動,可關注我們的公眾號:Mine-bio,后臺回復關鍵詞“PEI申請”參加活動哪個品牌的PEI轉染試劑性價比較高?PEI轉染試劑用途
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-BiocGMP級PEI轉染試劑優(yōu)化要素PEI轉染試劑的殘留檢測方法是什么?
抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質,轉染試劑、病毒轉導試劑、基因編輯工具等產品和定制服務,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉化;以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產,以此希望幫助國內科研工作者快速地接觸世界范圍內的技術,分享研發(fā)工具進步帶來的技術紅利,終為細胞、基因產業(yè)以及再生醫(yī)學行業(yè)等乃至整個生命科學行業(yè)賦能!若想咨詢更多關于PEI轉染試劑相關信息,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注公眾號Mine-bio回復“PEI申請”申請試用裝!
瞬時轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后5h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。若想申請PEI試用裝,可在Mine-bio公眾號后臺回復“PEI申請” 提交需求!用PEI轉染試劑為什么會出現(xiàn)沉淀?
上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司始終致力于為客戶提供一站式生物醫(yī)藥科技服務,以創(chuàng)新和為價值理念,通過自身研發(fā)團隊,以及與國內外專業(yè)科研團隊強強聯(lián)合,不斷創(chuàng)新,為生命科學和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)提供產品和服務。生物醫(yī)學工程是綜合應用生命科學與工程科學的原理和方法,從工程學角度在分子、細胞、組織、乃至整個人體系統(tǒng)多層次認識人體的結構、功能和其他生命現(xiàn)象,研究用于防病、治病、人體功能輔助及衛(wèi)生保健的人工材料、制品、裝置和系統(tǒng)技術的總稱。更多Polysciences PEI轉染試劑等相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!近期還有PEI試用裝申請活動,可關注我們的公眾號:Mine-bio,后臺回復關鍵詞“PEI申請”參加活動有哪些比較好的轉染試劑?cGMP級PEI轉染試劑如何儲存
Polysciences PEI和Polyplus的PEI哪個更好?PEI轉染試劑用途
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉染試劑用途
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