為了排除肝素對于細(xì)胞增長的抑制作用可能與防腐劑（這里采用芐醇作為防腐劑添加到UFH或LMWH中）有關(guān)。我們對不添加防腐劑的肝素進(jìn)行了相同實驗，結(jié)果對AT-MSC和BM-MSC細(xì)胞增殖抑制趨勢相同。在隨后的傳代培養(yǎng)到3代中的累積的群體中，兩種肝素UFH和LMWH對MSC增殖的影響也變得明顯，血小板裂解液中肝素濃度較低時累積細(xì)胞群體倍增指數(shù)(cPD)較高。CFU-F的塑料粘附生長性能是MSCs培養(yǎng)的先決條件，在96孔板中通過有限稀釋的方法結(jié)合泊松統(tǒng)計進(jìn)行CFU-F試驗，顯示集落形成率CFU-F在高濃度UFH時中度降低，而在高濃度Enoxaparin（LMWH）時明顯降低。這些結(jié)果表明高濃度的LMWH減少了CFU-F的形成，這與已報道的其他研究結(jié)論一致。 血小板裂解液進(jìn)口很難嗎？DMF備案血小板裂解液沉淀

MSCs在添加10%血小板裂解液和不同濃度肝素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天，隨后使用MTT法評估增殖。脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞（AT-MSC）和骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSC）培養(yǎng)的過程中，如果使用的UFH濃度低于0.61IU/mL或者使用Enoxaparin（LMWH）濃度低于0.024mg/mL(2.4IU/mL)時培養(yǎng)液均呈現(xiàn)凝膠狀態(tài)（灰色背景），而肝素濃度過高則對細(xì)胞增殖的負(fù)面影響明顯且以劑量依賴的方式提高。備注肝素濃度單位換算：肝素濃度國際單位(IU)衡量，1IU國際單位是指在規(guī)定的條件下，將1ml全血延長凝血3分鐘所需的量：1mg大約相當(dāng)于100IU的肝素。 DMF備案血小板裂解液沉淀用血液里的血小板濃縮物反復(fù)冷凍/解凍和超聲處理可制備成人血小板裂解液。

那么經(jīng)常有客戶會問道人血小板裂解液中的肝素的使用濃度到底如何抉擇呢？添加培養(yǎng)之前有必要花時間來優(yōu)化下這個肝素濃度參數(shù)嗎？現(xiàn)在小編通過比較了不同濃度的普通肝素（unfractionatedheparinUFH，分子量3000-30000Da)和低分子肝素(LMWH-分子量2000-12000Da)在hPL培養(yǎng)基中培養(yǎng)MSCs的增殖能力、成纖維細(xì)胞體外集落形成單位（colony-formingunit，CFU-F）、免疫表型和體外分化等情況，給大家作解答。從而幫助大家正確使用血小板裂解液。 

MSCs是異質(zhì)性的細(xì)胞群，其組成可能受培養(yǎng)條件的影響。血小板裂解液中肝素及其濃度高低對細(xì)胞形態(tài)和生長模式并未有明顯的影響。通過免疫熒光顯微鏡分析未發(fā)現(xiàn)波形蛋白(一種通常在中胚層起源的細(xì)胞中表達(dá)的中間絲)和α-SMA表達(dá)的差異，肝素濃度對于α-SMA(綠色)和波形蛋白(紅色)的分布并無影響。脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞（AT-MSC）和骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSC）本身免疫表型就是相似的，經(jīng)添加不同濃度肝素的血小板裂解液培養(yǎng)擴(kuò)增的AT-MSC和BM-MSC的流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示出CD29、CD73、CD90和CD105表達(dá)，而表面標(biāo)記CD14、CD31、CD34和CD45的缺失，可見肝素濃度對MSC免疫表型的表達(dá)水平幾乎是沒有影響的。 用血液里的血小板濃縮物反復(fù)冷凍和超聲處理可制備成人血小板裂解液。

細(xì)胞培養(yǎng)基制備1.比較好在4°C下解凍ELAREMPrime血小板裂解液過夜或在37°C水浴中解凍1小時。2.通過將10%ELAREMPrime血小板裂解液添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基（即MEMα、GlutaMAX補(bǔ)充劑、無核苷）和1%的青霉素/鏈霉素作為**終濃度來制備完整的細(xì)胞培養(yǎng)基。3.應(yīng)在完全細(xì)胞培養(yǎng)基中加入肝素以抗凝。我們建議添加肝素的**終濃度為2IU/mLPLSUPPLEMENT(貨號PL-SUP-500)or0.024mg/mLPLSUPPLEMENT-XF(貨號PL-SUP-500-XF).4.完整細(xì)胞培養(yǎng)基可在4°C下儲存，并穩(wěn)定約4周儲存和穩(wěn)定性ELAREMPrime在標(biāo)簽上注明的失效日期之前是穩(wěn)定的。ELAREMPrime在使用前在-20°C（或在-80°C進(jìn)行長期儲存）冷凍儲存時穩(wěn)定。解凍后，建議將未使用的ELAREMPrime樣品分裝并在-20°C下重新冷凍。應(yīng)避免ELAREMPrime的重復(fù)凍融循環(huán)，因為這會導(dǎo)不溶性顆粒形成的增加。使用時，只需預(yù)熱一份完整的細(xì)胞培養(yǎng)基，并將剩余的培養(yǎng)基冷藏在4-8°C。 血小板裂解液里面的沉淀對細(xì)胞有沒有影響？Merck血小板裂解液的正確使用方法

血小板裂解液中的沉淀在使用前需要過濾掉嗎？DMF備案血小板裂解液沉淀

血小板裂解液（plateletlysate，PL）是自體或異體血小板富集物經(jīng)細(xì)胞裂解后的產(chǎn)物，已經(jīng)被諸多研究推薦作為胎牛血清（fetalbovineserum，F(xiàn)BS）的替代品，應(yīng)用于間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcells，MSC）的大規(guī)模擴(kuò)增培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)基制備1.比較好在4°C下解凍ELAREMPrime血小板裂解液過夜或在37°C水浴中解凍1小時。2.通過將10%ELAREMPrime血小板裂解液添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基（即MEMα、GlutaMAX補(bǔ)充劑、無核苷）和1%的青霉素/鏈霉素作為**終濃度來制備完整的細(xì)胞培養(yǎng)基。3.應(yīng)在完全細(xì)胞培養(yǎng)基中加入肝素以抗凝。我們建議添加肝素的**終濃度為2IU/mLPLSUPPLEMENT(貨號PL-SUP-500)or0.024mg/mLPLSUPPLEMENT-XF(貨號PL-SUP-500-XF).4.完整細(xì)胞培養(yǎng)基可在4°C下儲存，并穩(wěn)定約4周儲存和穩(wěn)定性ELAREMPrime在標(biāo)簽上注明的失效日期之前是穩(wěn)定的。ELAREMPrime在使用前在-20°C（或在-80°C進(jìn)行長期儲存）冷凍儲存時穩(wěn)定。DMF備案血小板裂解液沉淀

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